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《（果樹學(xué)專業(yè)論文）利用分子標(biāo)記進(jìn)行草莓品種鑒定的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、沈髑1農(nóng)業(yè)^學(xué)破lj學(xué)位論史摘要。iM中混亂是困擾草莓科研和生產(chǎn)的大問題。分子標(biāo)記技術(shù)的出現(xiàn)為這一問題的解決展現(xiàn)出光明前景。本課題旨在通過對(duì)幾種分子標(biāo)記的系統(tǒng)研究．為建立可用于鑒定革莓品種的穩(wěn)定可靠的分子標(biāo)記體系奠定基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：1．改進(jìn)CTAB法從草莓幼葉提取的總DNA可用于RAPD、SCAR和lSSR分析。2．建立了適宜的草莓RAPD分析體系，20p．L反應(yīng)體積中包括59L稀釋10倍后的DNA模板，2p．L10xPCR反應(yīng)緩沖液．1．6p．LMgCl2，O．049LdNTP，1．20p．L引物和0．2uLTaqDNA聚合酶。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃30$e
2、c：94℃30see，40℃2min，72℃3min，45個(gè)循環(huán)：72℃延伸7min。在不同型號(hào)PCR儀上的擴(kuò)增結(jié)果表明浚RAPD體系重復(fù)性良好。3．利用8個(gè)RAPD引物對(duì)32份草莓材料進(jìn)行鑒定，其中25份易于區(qū)分。來自不同地點(diǎn)的3份全明星材料總體帶型基本一致，新明星與全明星之問只在一些弱帶上有差異，不易區(qū)分?？ì斄_莎和章子一號(hào)．紅臉頰和同本99號(hào)兩對(duì)品種帶型基本一致，只有一些弱帶上有差異。結(jié)合形態(tài)學(xué)調(diào)查的結(jié)果，初步認(rèn)為卡瑪羅莎和章子一號(hào)，紅臉頰和閂本99號(hào)兩對(duì)品種可能是同物異名的品種。3份豐香試材在葉片和果實(shí)形態(tài)上存在一定的差異，而引物RA】2—5、OPO．04
3、和WAA52部可以將其區(qū)分開，說明來自山東的兩份材料可能是混雜的品種，屬同名異物。4．仞步建立了草莓ISSR標(biāo)記分析體系。在供試的22個(gè)ISSR引物中篩選}l{4個(gè)用于草莓品種豁定。5．將兩個(gè)RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化成片段長(zhǎng)度分別為378bp和214bp的顯性SCAR標(biāo)記WS01和WS02。根據(jù)這兩個(gè)位點(diǎn)的帶型將供試草莓品種劃分為4個(gè)炎’型。關(guān)鍵詞：草莓；分子標(biāo)記：品種鑒定：RAPDISSR；SCAR前苦只U昂草莓(Exd舢n繃Duch．)因其植株矮小，適于在保護(hù)地進(jìn)行集約化栽培及生產(chǎn)周期短，收益快等特點(diǎn)，近年來在我國得到迅速發(fā)展。在市場(chǎng)需求的推動(dòng)下，業(yè)內(nèi)人士積極開展品種
4、選育和國外品種引進(jìn)工作，從而使生產(chǎn)上品種更新?lián)Q代的速度大大加快。這～方面有利于生產(chǎn)水平的提高，另一方面由于新老品種數(shù)量增加，品種引進(jìn)和銷售渠道混亂以及品種命名不規(guī)范等原因也導(dǎo)致同物異名(synonymy)和同名異物(homonymy)現(xiàn)象的增多，給品種資源的搜集、整理、保存和利用造成很大困難(趙長(zhǎng)增等，2003)。這在客觀上對(duì)草莓栽培品種的準(zhǔn)確鑒定提出了更高的要求。過去主要以形態(tài)標(biāo)記進(jìn)行品種鑒定工作，這需要有經(jīng)驗(yàn)的科學(xué)家在特定的時(shí)期進(jìn)行較長(zhǎng)時(shí)間的觀測(cè)分析，而且形態(tài)特征本身是遺傳物質(zhì)表達(dá)的結(jié)果，在此過程中易受環(huán)境條件的影響而改變，另外對(duì)于親緣關(guān)系較近的品種可資利用的
5、形態(tài)學(xué)標(biāo)記不多，這些因素導(dǎo)致很多鑒定工作難以給出確切的結(jié)論。分子標(biāo)記技術(shù)的出現(xiàn)給這～問題的解決展現(xiàn)出光明的前景。分子標(biāo)記通過直接檢測(cè)遺傳物質(zhì)來鑒定品種，可以不受氣候，地理等環(huán)境條件的影響，是一種比較理想的遺傳標(biāo)記，是對(duì)傳統(tǒng)遺傳標(biāo)記的有力補(bǔ)充。一、分子標(biāo)記遺傳標(biāo)記是鑒別基因組中基因位點(diǎn)的手段，是基因型特殊的易于識(shí)別的表現(xiàn)形式(賈繼增，1996)。品種鑒定及其它遺傳研究都離不開遺傳標(biāo)記。分子標(biāo)記是基于生物大分子，尤其是DNA的多態(tài)性而發(fā)展起來的遺傳標(biāo)記(張開春等，1999)。廣義的分子標(biāo)記包括蛋白質(zhì)標(biāo)記(如等位酶分析和蛋白質(zhì)序列分析)、DNA序列分析、DNA指紋分析和
6、DNA單鏈構(gòu)象多態(tài)性(single—strandedconformmionpolymorphism，SSCP)分析。通常所說的分子標(biāo)記是狹義的分子標(biāo)記，不包括蛋白質(zhì)標(biāo)記和直接的DNA序列分析(以下同)。DNA是遺傳物質(zhì)，穩(wěn)定且擁有豐富的變異。組成DNA分子的堿基雖然只有A、T、c、G四種，堿基配對(duì)的方式也只有A．T和c—G兩種，但堿基可以任何順序排列，因而與早期的遺傳標(biāo)記(形態(tài)標(biāo)記、生化標(biāo)記和細(xì)胞學(xué)標(biāo)記)相比，基于DNA的分子標(biāo)記具有以下優(yōu)越性：直接以DNA的形式表現(xiàn)，能穩(wěn)定遺傳．不受組織類別、發(fā)育時(shí)期和環(huán)境條件的影響；遍及整個(gè)基因組，數(shù)量眾多；多念性高：許多標(biāo)記
7、在非編碼區(qū)，表現(xiàn)選擇“中沈陽敏業(yè)大學(xué)碩上學(xué)位論文性”；檢測(cè)迅速(王永飛等，2001：周弈華等，1999；錢惠榮等，1998：鄒喻節(jié)等，2001)。隨著技術(shù)的逐步成熟和新策略的大量涌現(xiàn)，分子標(biāo)記的種類越來越豐富，人們按照不同的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其進(jìn)行了分類。根據(jù)遺傳特性可分為顯性遺傳的分子標(biāo)記和共顯性遺傳的分子標(biāo)記。根據(jù)所使用的分子生物學(xué)技術(shù)和引物的不同可分為以下三類(王倩與王斌．，2000；吳俊等，2002)：(一)基于Southern雜交技術(shù)的分子標(biāo)記此類標(biāo)記主要利用DNA的限制性酶切、酶切片段的Southern雜交和放射自顯影(或非同位素)等技術(shù)檢測(cè)DNA的多態(tài)性。限制性
8、片段長(zhǎng)度多
