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《四物湯對血虛證小鼠細胞凋亡影響的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、廣州中醫(yī)藥大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是個人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經特別加以注明引用的內容外，本論文不合任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明并致謝。本人完全意識到本聲明的法律結果由本人承擔。學位論文作者簽名量垂至1日期：掃7午年6月多日關于學位論文使用授權的聲明本人完全了解廣州中醫(yī)藥大學有關保留使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關部門機構途交論文的復印件和電子版，允許被查閱和借閱。本人授權廣州中醫(yī)藥大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數據庫進行檢
2、索，可以采用影印、縮印或其他復印手段保存和匯編本學位論文。(保密論文在解密后應遵守此規(guī)定)論文作者簽名±正墨2論文導師簽名日期：2。I午年舌月籮日摘要目的：觀察四物湯對血虛證小鼠肝細胞、T細胞凋亡及凋亡相關基因Bax、Bcl一2和Fas表達和凋亡啟動分子Caspase8、執(zhí)行分子Caspase3表達的影響。方法：60只C57BL／6J小鼠隨機分為空白組、模型組、四物湯低劑量組、四物湯中劑量組、四物湯高劑量組以及肌苷組。以腹腔注射環(huán)磷酰胺建立血虛證模型。模型組、四物湯低、中、高劑量組及肌苷組于實驗第ld按小鼠體重0．19／kg劑量腹腔注射環(huán)磷酰胺1次，空白組予等體積生理鹽水腹腔注射。四物湯低
3、劑量組予59·kg～·d～、中劑量組予lOg·kg～·d～、高劑量組予209·kg～·d。1灌胃，肌苷組予0．06g·kg一·d1灌胃?？瞻捉M和模型組則予以等體積生理鹽水。每日1次，連續(xù)灌胃7d。在實驗第7d，給藥1h后，每只小鼠眼眶后靜脈叢取血，采血量約0．1mL，采用全自動血液分析儀檢測外周血象。在實驗第8d，頸椎脫臼處死小鼠，剖腹取肝臟、脾臟及胸腺。稱量脾臟及胸腺質量以計算脾指數及胸腺指數。肝右葉切取1．OcmX1．OcmX1．Ocm組織塊，以10％甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片，TUNEL法檢測肝細胞凋亡。取脾臟制備淋巴細胞懸液，免疫磁珠法分離純化T細胞，制作細胞涂片，TUNEL法檢
4、測T細胞凋亡。取肝左葉-80℃保存，以備用于總RNA和蛋白提取。熒光定量PCR法檢測Bax、Bcl一2及FasmRNA表達。先將RNA逆轉錄cDNA，反應條件為，25。C溫育lOmin，42℃溫育50min，95℃加熱5min。再取cDNA進行PCR，反應條件為95。C預變性2min，95。C變性30s，58℃退火30s，72℃延伸lmin，反應35個循環(huán)。循環(huán)結束后，72℃延伸5min。采集每個樣品Ct值，比較各組的mRNA表達水平。Westernblot檢測Caspase3、Caspase8表達。先制備SDS-PAGE凝膠，10％分離膠8mL和5％濃縮膠4mL。室溫放置40min至膠凝
5、固。再將樣品蛋白和電泳上樣緩沖液混合，進行蛋白變性，反應條件為95℃lOmin，然后做蛋白電泳。接著將蛋白轉至PVDF膜上，反應條件為65V，2h。取出轉移膜置于封閉液中，封閉1h。將封閉后的膜放入一抗中，4℃反應過夜。將反應膜用1×TBST洗滌，洗滌3次，每次10min。將洗滌后的膜放入二抗中，室溫孵育1h。再用1XTBST洗滌，洗滌3次，每次10min。以電化學發(fā)光法顯影，再曝光及洗片，采用凝膠成像系統(tǒng)，對膠片進行掃描，檢測條帶灰度值，做蛋白半定量分析。結果：(1)外周血象：與模型組比較，四物湯中、高劑量組及肌苷組外周血紅細胞數、白細胞數以及血紅蛋白含量均有升高，P<0．05，有統(tǒng)計學
6、意義。四物湯低劑量組外周血紅細胞數、以及血紅蛋白含量均有升高，P<0．05，有統(tǒng)計學意義，白細胞數有上升趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。四物湯各劑量組血小板數有上升趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。肌苷組血小板數有下降趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。(2)臟器指數：與模型組比較，四物湯低、中、高劑量組及肌苷組脾指數均有升高，P<0．05，有統(tǒng)計學意義。四物湯低劑量組胸腺指數有升高趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。四物湯中、高劑量組及肌苷組胸腺指數有下降趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。(3)細胞凋亡百分率：與模型組比較，四物湯低、中、高劑量組肝細胞凋亡百分率均降低，P<0．05，有統(tǒng)計
7、學意義。肌苷組肝細胞凋亡百分率有下降趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。四物湯中、高劑量組T細胞凋亡百分率均降低，P<0．05，有統(tǒng)計學意義。四物湯低劑量組和肌苷組T細胞凋亡百分率有下降趨勢，P>O．05，無統(tǒng)計學意義。(4)凋亡相關基因mRNA表達：與模型組比較，四物湯高劑量組和肌苷組促凋亡基因Bax和FasmRNA表達水平降低，P<0．05，有統(tǒng)計學意義。四物湯低劑量組和中劑量組Bax和FasmRNA表達水平有下降趨勢
