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1、山東師范大學(xué)碩士學(xué)位論文導(dǎo)入鹽地堿蓬谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶基因?qū)M南芥耐鹽性的影響姓名：戚元成申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)指導(dǎo)教師：趙彥修2002.4.30一一一一一一熨燮些些鯉竺型絲竺I魚絲型望導(dǎo)入鹽地堿蓬谷膚甘膚轉(zhuǎn)移酶基因?qū)M南芥耐鹽性的影響摘要乙高鹽脅迫導(dǎo)致植物體內(nèi)的水勢不均及離子失衡，這種破壞失衡的現(xiàn)象在細(xì)胞水平和整個(gè)植物體水平都有發(fā)生。急劇的水勢和離子失衡致使分子破壞、植物生長遲滯甚至死亡。為達(dá)到耐鹽的功效植物體3個(gè)相互聯(lián)系的生理是很重要的:第一，應(yīng)當(dāng)避免或減緩損傷，第二，在新的脅迫下必須重建均衡狀態(tài)，第三，生長狀態(tài)必須得以恢復(fù)，即使生長緩慢
2、。高鹽導(dǎo)致的植物損傷的本質(zhì)還不是十分的清楚，其中一個(gè)重要原因可能是高鹽所產(chǎn)生的活性氧的緣故。為防止活性氧的損傷，植物采用了這樣一套防御系統(tǒng)，這一套防御系統(tǒng)的酶包括:超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、抗壞血酸過氧化物酶、谷膚甘膚轉(zhuǎn)移酶、谷朧甘膚過氧化物酶。由這些酶負(fù)責(zé)催化清除植物體內(nèi)的自由基。有跡象表明谷膚甘肚轉(zhuǎn)移酶在防止植物遭受由于肋、迫誘導(dǎo)產(chǎn)生的氧化損傷的過程中可能是一個(gè)關(guān)鍵因子。了解基因產(chǎn)物在何時(shí)何地表達(dá)對了解基因功能至關(guān)重要。目前有不少先進(jìn)的技術(shù)可以大規(guī)模的進(jìn)行基因功能表達(dá)分析，如用敲除或過量表達(dá)突變體和雙向凝膠技術(shù)可以來研究分析蛋白質(zhì)的變化以了解特
3、定基因的功能產(chǎn)了本實(shí)驗(yàn)就是將從鹽地堿蓬EST庫中克隆到的谷膚甘膚轉(zhuǎn)移酶基因，克隆到植物表達(dá)載體proklI中，由直接轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入農(nóng)桿菌以后，由花序浸泡法進(jìn)行坦魚圣的轉(zhuǎn)化，收獲轉(zhuǎn)基因植株的種子以后在含卡那霉素的MS培養(yǎng)基上篩選純合子。然后做PCR和PCR-southern，證明GST外源基因整合進(jìn)了擬南芥基因組中。進(jìn)一步做RT-PCR和Northern雜交證明處絲赴到困已在擬南芥中過量表達(dá)。為進(jìn)一步驗(yàn)證表達(dá)后的外源基因?qū)M南芥的耐鹽性有什么影響，在含有100mMNaCl的MS培養(yǎng)基上分別種植轉(zhuǎn)基因植株和野生型植株，發(fā)現(xiàn)生長情況有差異但不是很顯著;在土壤中
4、種植并用含loomm的Hoagland營養(yǎng)液培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株較野生型長的稍微高一些，由此可以看出鹽地堿蓬谷膚甘肚轉(zhuǎn)移酶的過量表達(dá)對擬南芥耐鹽性是有一定影響的。丫、中、、關(guān)鍵詞谷膚甘膚轉(zhuǎn)移酶;活性氧;鹽脅迫;謬達(dá)學(xué)科分類號Q78山東師范大學(xué)碩十論文SaltToleranceConferredbyOverexpressionofaSuaedaSalsaGlutathione-s-TransferaseGeneinArabidopsisAbstractHighsaltstressdisruptshomeostasisinwaterpotentialan
5、diondistributionThisdistributionofhomeostasisoccursatboththecellularandthewholeplantlevelsdrasticchangesinionandwaterhomeostasisleadtomoleculardamage,growtharrestandevendeath.Toachievesalttolerance,threeinterconnectedaspectsofplantactivitiesareimportant.First,damagemustbepreven
6、tedoralleviated.Second,homeostaticconditionsmustbere-establishedinthenew,stressfulenvironment.Third,growthmustresume,albeitatareducedrate.Thenatureofthedamagethathighsaltconcentrationsinflictonplantsisnotentirelyclear.Animportantcauseofdamagemightbereactiveoxygenspecies(ROS)gen
7、eratedbysaltstress.Toprotectthemselvesagainstthesetoxicoxygenintermediates,plantsemploydefensesystemsthatincludetheenzymessuchassuperoxidedismutases,catalases,ascorbateperoxidase,glutathione-s-transferase(GST)andglutathioneperoxidase(GPX)thatcatalyzethescavengingofROS.Someresul
8、tsindicatethatGSTcouldbeacriticalfactorinprotectingpla
