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《微囊藻毒素-lr誘導(dǎo)人支氣管上皮細(xì)胞凋亡及其機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterStudyonApoptosisandtherelatedMechanismInducedbyMicrocystins-LRintheHumanBronchialEpithelialCellsBy：MingfengYangSupervisor：Prof．HuiZhenZhangDepartmentofOccupationalandEnvironmentalHealthCollegeofPublicHealthApril，2014原創(chuàng)性
2、聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均以在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：柄闌耷日期：加伴年‘月，日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全
3、部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保留論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)或成果時(shí)，第一署名單位仍為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。．，一√r、學(xué)位論文作者簽名：枸碉繹日期：訟f≯年6月9日摘要MCs是藍(lán)藻生長過程中釋放的代謝產(chǎn)物，是一組具有生物活性的單環(huán)七肽化合物，是對人類及動(dòng)物健康威脅最大的一種細(xì)胞內(nèi)毒素。MCs性質(zhì)穩(wěn)定，常規(guī)飲用水物理及化學(xué)凈化處理措施很難將其有效清除。藻毒素從破裂的藻細(xì)胞中釋放到水體中，可經(jīng)過口腔攝入、肺部呼吸、皮膚接觸以及血液滲透等不同的途
4、徑給人類及動(dòng)物健康造成威脅。有文獻(xiàn)報(bào)道藍(lán)藻毒素可能會由于水體泡沫以及娛樂過程中產(chǎn)生的浪花等通過肺部呼吸進(jìn)入到人體，從而可能會引起呼吸系統(tǒng)疾病。目的本實(shí)驗(yàn)通過建立穩(wěn)定的微囊藻毒素-LR(Microcystins-LRMC—LR)染毒人支氣管上皮(HumanBronchialEpithelial，16HBE)細(xì)胞研究模型，觀察MC—LR對16HBE細(xì)胞的毒性凋亡作用及凋亡相關(guān)蛋白、線粒體途徑相關(guān)分子表達(dá)的影響，旨在闡明MC．LR誘導(dǎo)16HBE細(xì)胞的凋亡作用及其可能機(jī)制。方法1．人支氣管上皮細(xì)胞活性的測定采用MTT法檢測MC．LR對16HBE細(xì)胞活性的
5、影響，并找出半數(shù)有效濃度(ECso)，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)選擇毒素濃度提供依據(jù)。2．活性氧測定采用2，7．二氯熒光乙酰乙酸鹽(DCFH．DA)法測定16HBE細(xì)胞中RoS含量。3．線粒體膜電位測定JC．1染色法結(jié)合流式細(xì)胞儀測定熒光強(qiáng)度。4．細(xì)胞凋亡率的測定膜聯(lián)蛋白V二異硫氰酸熒光素／碘化丙啶(AnnexinV-FITC／PI)雙染色結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測。5．Caspase抑*lJ齊U(z-Val-Ala-Asp(O-methyl)一fluoromethylketone，z·VAD-FMK)以及Z．VAD．FMK和MC．LR聯(lián)合暴露分別對16HBE細(xì)胞活性影
6、響的測定MTT方法檢測活性并找出在后續(xù)試驗(yàn)中Z．VAD．FMK的濃度。6．Westernblot檢測Caspase．3，Caspase．9，Cyt．c，Bcl．2及Bax蛋白表達(dá)量。摘要結(jié)果1．MC．LR(0，1，10，20，30及4099／m1)處理16HBE細(xì)胞24h后，結(jié)果顯示隨著MC．LR濃度的升高，16HBE細(xì)胞的活性逐漸降低。且1，10，20，30及4099／ml染毒組細(xì)胞活性與對照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義儼<0．05)。2．當(dāng)暴露時(shí)間一定時(shí)，隨著MC．LR濃度的升高，16舳E細(xì)胞內(nèi)ROS的含量呈上升趨勢。當(dāng)MC．LR濃度分別為5，
7、10pg／ml時(shí)，ROS含量隨著暴露時(shí)間的增加而增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。3．當(dāng)MC．LR濃度為1099／mI時(shí)，不管作用于細(xì)胞24h或48h時(shí)，與對照組相比，線粒體膜電位均呈下降趨勢；且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。4．MC．LR(2．5，5，1099／m1)處理16HBE細(xì)胞24h后，細(xì)胞凋亡率分別為6．03％、17．90％、26。10％。當(dāng)暴露48h后，細(xì)胞凋亡率分別為19．40％、23．80％、32．23％。5．Caspase抑制劑單獨(dú)作用時(shí)，與對照組相比，當(dāng)Z．VAD．FMK濃度大于100pM時(shí)，細(xì)胞活性均降低，且差
8、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。當(dāng)抑制劑與毒素聯(lián)合作用時(shí)，當(dāng)MC．LR濃度分別為5，1099／mI，加入的Z．VAD．FMK濃度為109
