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1、分類號(hào)學(xué)號(hào)M201171526學(xué)校代碼10487密級(jí)碩士學(xué)位論文小麥TaWRKY7基因的克隆、表達(dá)及其遺傳轉(zhuǎn)化研究學(xué)位申請(qǐng)人：馮瑩學(xué)科專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：汪越勝副教授答辯日期：2014年1月19日萬方數(shù)據(jù)AThesisSubmittedinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofScienceIsolation,ExpressionAnalysisandGeneticTransformationoftheTaWRKY7GeneinWheat(TriticumaestivumL.)Candid
2、ate：YingFengMajor：Biochemistry&MolecularbiologySupervisor：Prof.YueshengWangHuazhongUniversityofScience&TechnologyWuhan430074,P.R.ChinaJanuary,2014萬方數(shù)據(jù)獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除文中已經(jīng)標(biāo)明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果。對(duì)本文的研究做出貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)
3、位論文作者簽名：日期：年月日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)華中科技大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密□。（請(qǐng)?jiān)谝陨戏娇騼?nèi)打“√”）學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日萬方數(shù)據(jù)華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要WRKY蛋白是一類轉(zhuǎn)錄因子超家族，它們含有保守的WRKY結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域可以與DNA上的W盒
4、結(jié)合，從而激活或抑制特定基因的表達(dá)。WRKY轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)節(jié)作用幾乎貫穿了植物的整個(gè)生長(zhǎng)發(fā)育過程，如種子的萌發(fā)、植株的生長(zhǎng)發(fā)育、衰老以及對(duì)生物和非生物逆境的響應(yīng)等。但是WRKY轉(zhuǎn)錄因子具體的調(diào)節(jié)機(jī)制還不是很清楚。本研究利用DFCI數(shù)據(jù)庫中的小麥EST序列拼接得到小麥TaWRKY7基因的序列信息，并以小麥cDNA為模板，通過常規(guī)基因克隆技術(shù)克隆得到該基因。利用生物信息學(xué)方法，進(jìn)行ORF的預(yù)測(cè)、蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)、蛋白質(zhì)各種理化性質(zhì)分析、同源性分析等。發(fā)現(xiàn)目的基因與HvWRKY7同源性較高，在97%的區(qū)域有94%的同源性，因此我們將目的基因命名為TaWRKY7；該基因翻譯的蛋白質(zhì)含
5、有1個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域，鋅指結(jié)構(gòu)類型為C2H2，屬于Ⅱ類WRKY轉(zhuǎn)錄因子。通過半定量RT-PCR分析TaWRKY7基因在小麥幼苗不同組織和不同非生物脅迫條件下的表達(dá)模式，推測(cè)其可能響應(yīng)的逆境脅迫類型及參與的信號(hào)通路，結(jié)果表明：該基因在小麥葉片中的表達(dá)量最高，其次是根，莖中的表達(dá)量很低；在NaCl（200mM）、PEG（20%）、ABA（100μM）和低溫（4℃）脅迫處理下，TaWRKY7對(duì)NaCl有響應(yīng)，在NaCl處理下其表達(dá)明顯上調(diào)。另外還構(gòu)建了真核細(xì)胞表達(dá)載體pAHC25-TaWRKY7，利用基因槍介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將其轉(zhuǎn)入鄭麥9023盾片中，通過組織培養(yǎng)獲得再生苗，然后對(duì)再生
6、植株進(jìn)行分子鑒定，共獲得6株TaWRKY7過表達(dá)植株。本研究為進(jìn)一步探索TaWRKY7在小麥生長(zhǎng)發(fā)育過程中所參與的信號(hào)調(diào)節(jié)途徑及其發(fā)揮的生物學(xué)調(diào)節(jié)作用奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：TaWRKY7；基因克?。环巧锩{迫；RT-PCR；遺傳轉(zhuǎn)化I萬方數(shù)據(jù)華中科技大學(xué)碩士學(xué)位論文AbstractWRKYtranscriptionfactorsarenamedaftertheconservedWRKYdomain.TheycanregulatetheexpressionofcertaingenesbybindingtotheW-boxwhichislocatedinthepromoterre
7、gionoftargetgene.WRKYproteinsareinvolvedintheentireprocessofplantgrowthanddevelopment,suchasseeddormancyandgermination,senescence,bioticstress,abioticstress.WhilethedetailregulationmechanismofWRKYproteinsremainsunknown.Inthisresearch,theseque
