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1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)碩士學(xué)位論文小麥WOX基因的克隆與表達(dá)分析CharacterizationandexpressionanalysisofWOXhomeodomaintranscriptionfactorinvolvedin。develooment。。wheatemDryoaeveloomentIrom研究生：趙珊指導(dǎo)老師：魏育明研究員江千濤研究員萬(wàn)方數(shù)據(jù)CharacterizationandexpressionanalysisofWOXhomeodomaintranscriptionfactor·volved。!mbryodevelopmentfromwheatinvolvedinembr
2、y0developmentIromByShanZhaoDirectedbyProfessorYu—mingWeiProfessorQian—taoJiangJune，2014嬲㈣加㈣川萬(wàn)方數(shù)據(jù)論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研究生簽名：怒無(wú)情沙炒年易月I1日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲
3、明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意INJII農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：導(dǎo)師簽名趣竹J伽肛年舌月『JH仂一年6其
4、fB萬(wàn)方數(shù)據(jù)小麥WOX基因的克隆與表達(dá)分析研究生：趙珊指導(dǎo)教師：魏育明研究員江千濤研究員摘要本研究以小麥及其近緣屬作為研究材料，通過(guò)同源克隆，熱不對(duì)稱交錯(cuò)PCR及RT-PCR等方法，成功分離得到WOX2和WOX5s基因序列，并對(duì)TaWOX2和TaWOX5
5、s基因的表達(dá)及功能進(jìn)行了研究，了解它們?cè)谛←溑咛グl(fā)生過(guò)程中的作用。本研究主要結(jié)果如下：1．克隆得至UTd,麥WOX2基因序列，全長(zhǎng)為2045bp，編碼區(qū)長(zhǎng)度為969bp，編碼322個(gè)氨基酸殘基。在氨基酸水平上進(jìn)行序列比對(duì)發(fā)現(xiàn)，小麥WOX2與OsWOX2和ZmWOX2A的homeodomain區(qū)域相似性達(dá)89．6％和85．1％，并且該基因序列具有WOX家族現(xiàn)代進(jìn)化支的2個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，homeodomain和WUS．box。據(jù)此認(rèn)為，克隆到的序列編碼小麥WOX2蛋白，命名為TaWOX2。2．克隆得到了小麥WOX5基因序列，序列分析的結(jié)果表明WOX5基因分為三種等位變異類型，全長(zhǎng)分別為1
6、038bp、1029bp和1032bp，編碼區(qū)長(zhǎng)度分別為639bp、630bp和633bp，編碼209-212個(gè)氨基酸殘基。將克隆得到的序列與水稻和玉米WOX5蛋白序列進(jìn)行比對(duì)分析，發(fā)現(xiàn)TaWOX5a與OsWOX5和ZmWOX5B的相似性分別是78．8％和65．5％，并且TaWOX5s的homeodomain區(qū)域氨基酸序列與水稻玉米的該區(qū)域完全一致。TaWOX5s具有WOX家族現(xiàn)代進(jìn)化支的3個(gè)保守結(jié)構(gòu)域，分別是homeodomain、WUS．box和EAR．1ike。據(jù)此認(rèn)為，克隆到的序列編碼小麥WOX5蛋白，分別命名為TaWOX5a，TaWOX5b和TaWOX5c。在小麥近緣屬材
7、料中克隆到的WOX5基因高度同源，只存在兩個(gè)位點(diǎn)的插入缺失變異。3．分別將TaWOX2和TaWOX5c分別連入原核表達(dá)載體pET-30a，轉(zhuǎn)入大腸桿菌萬(wàn)方數(shù)據(jù)BL21(DE3)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)基因成功表達(dá)，得到約34kDa和26kDa的重組蛋白。重組蛋白的分子量大小與核酸序列預(yù)測(cè)結(jié)果一致，表明克隆到的序列準(zhǔn)確代表了該基因的開(kāi)放閱讀框。4．通過(guò)熒光定量PCR分析了這兩個(gè)基因在普通小麥中的表達(dá)模式，TaWOX2主要在種子發(fā)育過(guò)程中表達(dá)，TaWOX2在種子發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)水平很有可能反映了其在胚發(fā)育過(guò)程中的表達(dá)水平，因此，推測(cè)TaWOX2基因和小麥的胚發(fā)育相關(guān)。TaWOX5s主要在根和
8、愈傷組織中表達(dá)，在愈傷組織中，TaWOX5s在2，4．D的誘導(dǎo)下表達(dá)量逐漸升高，而在NAA，6-BA，玉米素和激動(dòng)素的誘導(dǎo)下表達(dá)量降低。因此，推測(cè)TaWOX5s可能與小麥根的形成和發(fā)育有關(guān)，并且TaWOX5的表達(dá)受生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的調(diào)節(jié)。關(guān)鍵詞：WOX,小麥，原核表達(dá)，熒光定量PCR，聚類分析II萬(wàn)方數(shù)據(jù)CharacterizationandexpressionanalysisofWOXhomeodomaintranscriptionfactorinvolvedin
