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《篩選并鑒定果蠅jumeau相互作用的蛋白質(zhì)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)學(xué)校代碼：10225學(xué)號(hào)：S14554學(xué)位論文篩選并鑒定果蠅Jumeau相互作用的蛋白質(zhì)指導(dǎo)教師姓名：申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：張晴金麗華教授碩士2014年4月東北林業(yè)大學(xué)學(xué)科專業(yè)：遺傳學(xué)論文答辯日期：2014年6月授予學(xué)位日期：答辯委員會(huì)主席：論文評(píng)閱人：春a-,c4t,匕q,萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：S14554＼㈣Y2㈣723㈣24秈4DissertationfortheDegreeofMasterScreeningandidentificationofproteinsinteract
2、ingwithDrosophilaJumeauCandidate：Supervisor：AssociateSupervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：ZhangQingProf．JinLihuaMasterGeneticsJune，2014NortheastForestry萬方數(shù)據(jù)摘要果蠅作為一種典型的模式生物，在昆蟲和人類的天然免疫研究中一直占有重要的地位?，F(xiàn)今，許多關(guān)于天然免疫的研究結(jié)果都是從對(duì)果蠅的研究中發(fā)現(xiàn)的。果蠅Schneider2(s2
3、)細(xì)胞株來自黑腹果蠅培養(yǎng)末期的胚胎，其許多特征顯示與果蠅巨噬細(xì)胞類似。果蠅S2細(xì)胞的培養(yǎng)簡(jiǎn)單、高效，且同時(shí)具有哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)和昆蟲表達(dá)系統(tǒng)二者的優(yōu)良特征，是一個(gè)高效率的表達(dá)系統(tǒng)。Jumeau(Jumu)蛋白是果蠅體內(nèi)的一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄因子，編碼719個(gè)氨基酸，是首個(gè)被發(fā)現(xiàn)的具有雙重功能的FKH／WH家族蛋白，能引起異染色質(zhì)的大規(guī)模修飾。但是目前Jumu蛋白在果蠅天然免疫中的作用及轉(zhuǎn)錄調(diào)控機(jī)制還不十分明確。本實(shí)驗(yàn)以L．Giot及KCtGuruharsha等人的研究結(jié)果一果蠅Jumu蛋白與Cos、CG5375及L(1)SC之間存在潛在的蛋白相互作用一為基礎(chǔ)。通過構(gòu)建
4、以GFP蛋白為標(biāo)簽的重組質(zhì)粒，制備高效率的GFP多克降抗體，利用果蠅S2細(xì)胞系蛋白表達(dá)系統(tǒng)，蛋白免疫共沉淀技術(shù)來驗(yàn)證Cos、CG5375及L(1)sc與Jumu的相互作用。結(jié)果顯示，果蠅Jumll蛋白與Cos、CG5375及L(1)sc蛋白之間不存在相互作用。為此，我們通過轉(zhuǎn)染空載體pMK33一Flag作為陰性對(duì)照和pMK33．Flag-Jumufulllength重組質(zhì)粒到果蠅S2細(xì)胞中并篩選穩(wěn)定的細(xì)胞表達(dá)體系，利用蛋白免疫共沉淀技術(shù)結(jié)合雙向電泳實(shí)驗(yàn)篩選與Jurau蛋白相互作用的蛋白。通過相關(guān)軟件對(duì)雙向電泳凝膠圖像分析，共篩選出7個(gè)差異蛋白，其相對(duì)分予量分別為
5、141KDa，82KDa，69KDa，44KDa，38KDa，27KDa和26KDa。根據(jù)以上篩選結(jié)果，我們對(duì)這些差異樣品點(diǎn)進(jìn)行摳點(diǎn)處理并消化，迸行質(zhì)譜分析。最終得到這些差異點(diǎn)的具體氨基酸序列，進(jìn)行數(shù)據(jù)庫檢索得到其所屬蛋白為Act5C，Hsc70—3，Rpn6，betaTub56D和CGl0306。因而，接下來我們將會(huì)通過免疫共沉淀技術(shù)對(duì)這些相互作用進(jìn)行驗(yàn)證。關(guān)鍵詞Jumu蛋白：蛋白質(zhì)免疫共沉淀；蛋白相互作用；果蠅S2細(xì)胞；雙向電泳萬方數(shù)據(jù)AbstractDrosophilamelanogaster,asatypicalmodelorganism，playsan
6、importantroleininnateimmunitystudiesofinsectsandhumans．Nowadays，manyfindingsabouttheinnateimmunityareIYomtheresearchofDrosophila．DrosophilaSchneider2(s2)Cellswasderivedfromaprimarycultureoflatestage(20—24hoursold)Drosophilamelanogasterembryos，manyfeaturesoftheS2celllinesuggestthatiti
7、sderivedfromamacrophage．1ikelineage．S2celllinethatcultureissimpleandefficient，whilehavingexcellentcharacteristicsbothofinsectexpressionsystemandmammalianexpressionsystem，isahighlyefficientexpressionsystem．Jumeau(Jumu)proteinisanimportanttranscriptionfactorinDrosophila，containing719am
8、inoacids．Jum
