大豆耐鹽基因gmhal3a和gmhal3b的克隆與初步功能驗證

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1、CLoNINGANDFUNCTIoNALANALYSIS0NHALoToLERANCE3GENEGMHAL3AANDGMHAL3BFRoMSOYBEAN(G￡yiI啜ⅣEMAX)ByWangMingxiaTheThesisSubmittedtoNanjingAgriculturalUniversityNanjingP．R．ChmaInPartialFulfillmentoftheRequirementsTheMasterDegreeSupervisedByProfessorXingHanCompletedinNovember2

2、012原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品成果。對本文的研究做出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者(需親筆)簽名：矽銅鐓矽7砂年『1月醒目學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京農(nóng)業(yè)大學(xué)可以將本

3、學(xué)位論文的全部或都分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文。保密口，在——年解密后適用本授權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密口。(請在以上方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者(需親導(dǎo)師(需親筆)簽名"2AJ2,年／}月謠日W億年／／月凈目錄摘要?????????????????????????????????????．???????I．ABS；TRACT．．??????????．?．????．????????．．????．??????????．III縮略語??．．．??????????????????

4、??????????。??????????。V第一章文獻綜述????????????????．．．????????????l1．1植物的耐鹽性研究進展???????????????????????11．1．1鹽脅迫對植物生長的影響?????????????????????11．1．2植物耐鹽機理?????????????????????????．31．2耐鹽基因HAL3的研究進展?????????????????????．51．2．1HAL3基因在植物體內(nèi)的分布??????????????????。61．2．2I-L,IL3基

5、因的功能研究概況???????????????????．．61_3本研究的目的和意義???????????????????????．10第二章大豆耐鹽基因HAL3a和HAL3b的克隆和表達分析???????????132．1材料????????????????????????????????????????．132．1．1植物材料???????????????????????????132．1．2載體和菌株??????????????????????????132．1．3主要試劑????????????????????????

6、???132_2實驗方法????????????????????????????．．132．2．1大豆總RNA的提取及eDNA第一鏈的合成????????????132．2．2大豆兩個GmHAL3基因的cDNA全長PCR擴增??????????14212．3回收純化目的基因???????????????????????152．2．4PCR產(chǎn)物的連接???????????????????????．．162．2．5大腸桿菌DH5a感受態(tài)細胞的轉(zhuǎn)化????????????????162．2．6質(zhì)粒的提取???????????????

7、???????????172．2．7RNA干擾片段的擴增?????????????????????．172．2．8大豆兩個GmHAL3基因的生物信息學(xué)分析????????????．182．2．9組織表達分析?????????????????????????182．2．10非生物脅迫分析???????????????????????。182．2．1l實時熒光定量PCR(Real-timeQuantativePCR)?????????．182．3結(jié)果????????????????????????????????????????1

8、92．3．1大豆兩個GmHAL3基因eDNA全長序列及RNA干擾片段的獲得??一19大豆耐鹽基因GmHAL3a和GmHAL3b的克隆與初步功能驗證2．3．2大豆兩個G搬三翻三3基因的氨基酸序列分析????????????．202．3．3GmHAL3a和GmHAL3b基因的組織