沙棘多糖對小鼠急性肝衰竭的保護作用及機制研究

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1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學研究生學位論文獨創(chuàng)聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包括其他^已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包括為獲得我?；蚱渌逃龣C構(gòu)的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關(guān)責任。日期：2014．06．10內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學研究生學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學有關(guān)保護知識

2、產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學。學校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱。學?？梢怨紝W位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，采用影印、縮印或其他手段保存論文。．氐p論文僦名：達毯指導教師簽名：矽?！?距。。1日期：2014．06．10摘要本文研究了沙棘多糖對小鼠急性肝衰竭的保護作用，

3、同時對其保護機制進行了探討，為研究沙棘多糖的保肝作用提供科學的依據(jù)。采用水提醇沉法提取沙棘多糖，經(jīng)過Sephadex凝膠層析純化沙棘多糖。對純化后的沙棘多糖的純度和單糖組成進行了檢測。利用紫外光譜掃描和高效液相色譜鑒定了沙棘多糖的純度，結(jié)果顯示純化后的沙棘多糖為成分均一的多糖物質(zhì)。通過高效液相色譜法測定沙棘多糖中單糖的組成，結(jié)果顯示，沙棘多糖主要由5種單糖構(gòu)成，它們是Man、Rha、Glu、Gal和Ara，它們在沙棘多糖中的百分含量為12．73％、5．86％、26．71％、6．30％、48．4l％

4、，摩爾比為2．02：1．02：4．24：l：9．22。采用LPS／D—GaIN聯(lián)合誘導的小鼠急性肝衰竭模型，研究沙棘多糖的保肝作用。120只雄性C57BL／6小鼠隨機分為六組：正常對照組、模型組、地塞米松陽性對照組、沙棘多糖低、中和高劑量組。沙棘多糖低、中、高劑量組分別以50、100和200mg·kg。沙棘多糖灌胃14天。通過腹腔注射LPS(1099．kgo)和D—GaIN(700mg·kgo)建立急性肝衰竭模型，陽性對照組腹腔注射地塞米松(10mg·kg‘1)。建模4h和8h后采集血清和和肝臟組

5、織，檢測ALT、AST、SOD、GSH．PX的活性和MDA的含量。通過病理學觀察肝臟組織學變化。通過ELISA檢測血清中TNF一0【和IL．1p的表達量。通過免疫組織化學法測定肝臟內(nèi)TLR4、P．ERK、NF．KB、PPAR．T的表達。通過WesternBlot檢測肝臟中P．ERK、P．p38MAPK、P．JNK、SOCS3的表達。結(jié)果表明，沙棘多糖顯著地抑制了肝衰竭小鼠血清ALT和AST活性(P<0．0l，P<0．05)：促進了血清和肝臟SOD和GSH．PX活性升高(P<0．01，P<0．05)

6、、抑制了MDA的產(chǎn)生(P<0．01)。病理學觀察表明，沙棘多糖明顯減輕炎癥反應造成的肝臟組織細胞損傷。血清TNF．。c和IL．1p的表達在沙棘多糖組也顯著降低(P<0．01)。進一步檢測發(fā)現(xiàn)，沙棘多糖抑制了TLR4的表達，也抑制了ERK、p38MAPK、JNK的磷酸化，抑制了核內(nèi)NF一1cBp65的表達，同時發(fā)現(xiàn)沙棘多糖并未影響SOCS3和PPAR—Y的表達。因此我們推測，沙棘多糖通過調(diào)控TLR4．MAPK—NF．KB信號通路起到抗氧化和抗炎作用，緩解了LPS／D—GalN誘導的小鼠急性肝衰竭。關(guān)

7、鍵詞：沙棘多糖：內(nèi)毒素；D．氨基半乳糖：急性肝衰竭；地塞米松StudyontheProtectiveEffectsandMechanismofSeabuckthornPolysaccharideonAcuteLiverFailureinMiceAbstractThispaperstudiestheprotectiveeffectsandmechanismofseabuckthornpolysaccharidesonmicewithacuteliverfailureinordertoprovides

8、cientificbasisforthehepatoprotectiveeffectsofseabuckthornpolysacchafides．Seabuckthornpolysaccharideswasextractedbythemethodsofwaterextractandalcoholprecipitation，andpurifiedbySephadexgelchromatographY．Wetestedtheputityandmonosaecharidecomposit