植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ace抑制肽及分離純化研究

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1、潼壓料技大學論文題目：植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽及分離純化研究學科門類：工學一級學科：化學工程與技術(shù)培養(yǎng)單位：生命科學與工程學院碩士生：張秋紅導師：陳合教授舒國偉副教授oPTIMIZATIoNANDPURIFICATIoNoFACEINHIBIToRYPEPTIDESFRoMGoATMILKFERMENTEDBY三4C刃匕忸么C：ⅡZ嬲PZ4刪R硼夕ADissertationSubmittedtoShaanxiUniversityofScienceandTechnologyinPartia

2、lFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofEn2ineeringScienceThesisSupervisor：Professor．H．．．．．e．．．．．C．．．．h．．．．e．．．n．．：AssociateProfessorGuo．weiShuMay,2014植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽優(yōu)化及分離純化摘要血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(AngiotensinConveningEnzyme，ACE)在人體血壓調(diào)節(jié)過程中有著非常重要的作用，ACE抑

3、制肽可有效地抑制ACE的活性，從而保持生物體的血壓穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn)，一些乳桿菌在其發(fā)酵過程中可產(chǎn)生ACE抑制肽，且食源性ACE抑制肽與傳統(tǒng)的降壓藥物相比，具有生產(chǎn)成本低、較易吸收、對患者毒副作用低等優(yōu)勢。近年來國內(nèi)外對ACE抑制肽的研發(fā)成為廣大科研工作者研究的新熱點，日本和芬蘭等國已有降壓產(chǎn)品上市，而國內(nèi)尚處于研究階段。本課題以陜西豐富的羊乳為原料乳，利用益生菌發(fā)酵生產(chǎn)ACE抑制肽，為ACE抑制肽的制備開辟新的途徑。本課題選用實驗室已選出的4株益生乳桿菌分別在復原羊乳中發(fā)酵，篩選出具有較高ACE抑

4、制活性的植物乳桿菌L69，通過單因素試驗和響應面設計分別優(yōu)化了L69發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的發(fā)酵培養(yǎng)基和產(chǎn)肽條件，確定了L69產(chǎn)生ACE抑制肽的最適發(fā)酵條件。得到發(fā)酵乳經(jīng)超濾粗分離、DA201．C大孔吸附樹脂脫鹽精制及SephadexG．15凝膠層析等方法純化ACE抑制肽，獲得以下結(jié)論：(1)Plackett．Burrnan試驗結(jié)果表明乳糖和酪蛋白是影響植物乳桿菌發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的主要物質(zhì)。采用中心復合設計(CentralCompositeDesign)試驗得到優(yōu)化后的發(fā)酵條件為：乳糖0．

5、49％，酪蛋白濃度0．23％。驗證試驗ACE抑制率高達89．16％，比對照組增加了17．83％。L69活菌數(shù)為9．00×108cfu／mL，也高于對照組。(2)單因素試驗考察了不同產(chǎn)肽條件在羊乳發(fā)酵的過程中對于ACE抑制率的影響，Plackett-Burman試驗篩選結(jié)果表明，影響植物乳桿菌L69發(fā)酵羊乳產(chǎn)ACE抑制肽的顯著性因子是：溫度、氯化鈣和吐溫．80。采用爬坡試驗和Box．Behnken設計確定了最適的產(chǎn)肽條件為：溫度35℃、氯化鈣濃度為O．07％及0．04％的吐溫．80。驗證試驗ACE

6、抑制率高達88．91％，較對照組增加了19．48％，將兩個響應面試驗與空白組做對照試驗，結(jié)果表明，L69產(chǎn)ACE抑制肽的最適生產(chǎn)條件是乳糖濃度為O．49％，酪蛋白濃度O．23％，此條件下產(chǎn)生的ACE抑制率最高。(3)分離純化結(jié)果表明，超濾后分子量(M)

7、的SephadexG．15凝膠分離，此條件下所得的三個峰G1、G2和G3中G2的IC50最小為0．125mg／mL，且經(jīng)SephadexG．15凝膠層析后所得的樣品并非是單一的肽，還需要進一步的純化過程才能得到較純的ACE抑制肽。本課題制備的ACE抑制肽，具有較高的ACE抑制率，可作為高血壓患者的輔助降壓食品。為開發(fā)新型降壓酸羊奶產(chǎn)品提供了參考，同時也提高了陜西省羊乳產(chǎn)品的附加值，對擴大羊乳產(chǎn)業(yè)的發(fā)展有重要意義。關(guān)鍵詞：ACE抑制肽，植物乳桿菌，羊乳，響應面法，分離純化oPTIMIZ』～TIoN

8、ANDPURIFICATIoNoFACEINHIBIToRYPEPTIDESFRoMGo』蜘rMILKFERMENTEDBY厶4C加84C皿￡【五§PL4刪R硼，ABSTRACTAngiotensinconvertingenzyme(ACE)playsanimportantroleinhumanbloodpressureregulation，andACEinhibitorypeptidescouldinhibideACEactivity,keephumanbloodpressuresteady．