cytochalasin h對mpp+誘導的pc12細胞凋亡的保護作用及其機制研究

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1、CytochalasinH對Mpp+誘導的PCI2細胞凋亡的保護作用及其機制研究中文摘要內(nèi)生真菌(Endophytic劬西)是指其在生活史的某一段時期生活在植物組織內(nèi)，對植物組織沒有引起明顯病害癥狀的真菌。青梅屬(Vaticagenus)植物富含白藜蘆醇(Resveratr01)化合物，有報道稱它能阻止氧化應(yīng)激引起的PCI2細胞凋亡?；趦?nèi)共生理論，青梅屬植物青皮內(nèi)生菌極有可能產(chǎn)生與白藜蘆醇相同或相似的活性成分。我們對青皮內(nèi)生菌(Phomopsisp．)固體發(fā)酵產(chǎn)生的化合物進行初步篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)細胞松弛素H(CytochalasinH，Cy

2、tH)對損傷的PCI2細胞可能有潛在的保護作用。目前尚未發(fā)現(xiàn)對C叭H該方面活性的研究報道，因此對其作用以及作用機制研究是非常必要和有意義的。帕金森病(Parkinson’Sdisease，PD)是一種神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其發(fā)病原因與黑質(zhì)多巴胺(Dopamine，DA)能神經(jīng)元漸進性缺失有關(guān)，而凋亡是其神經(jīng)元丟失的主要形式。該病的主要發(fā)病機制之一為氧化應(yīng)激。CytH與上述白藜蘆醇均來源于青梅屬植物，它是否也能產(chǎn)生與后者相似的抗氧化應(yīng)激作用從而對PD產(chǎn)生有益的影響呢?為此，本實驗應(yīng)用甲基苯基吡啶離子(1-methyl-4-phenylpyrid

3、inium，MPP+)制備PD體外細胞模型，觀察了Cytn對其損傷和凋亡的影響，并對其作用機制進行了初步研究。主要結(jié)果如下：1．CytochalasinH對Mpp+誘導的PCI2細胞損傷的影響方法：MTT法檢測PCI2細胞存活率，比色法測定LDH釋放率。分組及加藥：(1)對照組：0．01％DMSO溶劑；(2)模型組：500I-unol／LMPP+；(3)陽性藥組：100lamol／L司來吉蘭；(4)受試藥物組：不同濃度C舛H。受試藥和陽性藥采用3種加藥方法：①預處理：先向PCI2細胞中加入藥物培養(yǎng)4h后再加入MPP+；②后干預：MPP+作用

4、4h后再加藥；③同時干預：藥物與MPP+同時加入。各組MPP+作用時間均持續(xù)48h。結(jié)果：(1)CytH化合物細胞毒性：與對照組比較，0．00125～2Ftmol／LCytH組細胞存活率均無顯著性降低。在0．05，O．1，O．21．tmol／L時，CytI-I反使PCI2細胞存活率增加，分別為118．220／社4．29％，119．000／社7．33％，118．480／扯6．85％，與對照組相比，均具有顯著性差揚州大學碩士學位論文異(P<0．01)。表明CnH化合物不僅沒有細胞毒性，反而能夠促進神經(jīng)細胞增殖。(2)CytH化合物預處理對Mpp

5、+誘導的PCI2細胞存活率和LDH的影響：CytH預處理在0．001～0．01p,mol／L范圍內(nèi)細胞存活率呈濃度依賴性上升(r=O．939、P<0．01)，CytH濃度為O．01Irtmol／L時存活率達到103．7％_40．3％(P

6、L范圍內(nèi)細胞存活率呈濃度依賴性上升(r=O．890、P<0．01)，CytH濃度為O．15gmol／L時存活率達到104．3％．42．4％(P

7、率達到96．6％士4．6％(P

8、P+作用后可見細胞發(fā)生凋亡的形態(tài)學改變：細胞表面的微絨毛減少或者消失；細胞核膜皺縮，細胞核體積縮??；染色質(zhì)致密并凝聚成塊狀聚于細胞核周邊；細胞質(zhì)中可見線粒體明顯腫脹，甚至產(chǎn)生空泡