狂犬病病毒結(jié)構(gòu)基因的克隆及犬瘟熱病毒n蛋白基因與egfp基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建

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1、萬方數(shù)據(jù)獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的貢任何獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽名:亙躺時間:觸年6月)。日關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的說明本人完全了解新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即:新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電

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3、授(新疆農(nóng)業(yè)大學(xué))萬方數(shù)據(jù)狂犬病病毒結(jié)構(gòu)基因的克隆及犬瘟熱病毒N蛋白基因與eGFP基因重組質(zhì)粒的構(gòu)建摘要本研究從BHK-21細(xì)胞培養(yǎng)的狂犬病病毒SRV9株病毒液中提取病毒總RNA,通過反轉(zhuǎn)錄PCR(ReversetranscriptPCR,RT-PCR)技術(shù)進(jìn)行狂犬病病毒結(jié)構(gòu)基因的擴(kuò)增,得到1352bp的N基因(核蛋白基因,nucleoproteingene,N),893bp的P基因(磷酸化蛋白基因,phosphoproteingene,P),608bp的M基因(基質(zhì)基因,matrixproteingene

4、,岣,1574bp的G基因(糖蛋白基因,glycoproteingene,G),3372bp的L1基因(大轉(zhuǎn)錄蛋白l,largeproteingenel,L1)以及3012bpL2基因(大轉(zhuǎn)錄蛋白2,largeproteingene2,L2),并將其分別連接于pMDl9-T載體,進(jìn)行測序并與SADB19株比對,實驗結(jié)果如下:N基因、P基因、M基因、G基因、L1基因以及L2基因的核苷酸序列與SADB19株的核苷酸同源性分別為100%、99.66%、99.67%、99.04%、100%及98.70%,氨基酸序列

5、的同源性分別為100%、98.99%、100%、98.65%、100%以及99.91%。應(yīng)用重組PCR技術(shù)進(jìn)行基因片段的拼接,構(gòu)建增強(qiáng)型綠色熒光蛋白eGFP基因與犬瘟熱病毒N蛋白基因的重組質(zhì)粒(pT--eGFP.CDVN)、狂犬病病毒融合基因P.M的重組質(zhì)粒(pT-PM)以及融合基因L1.L2的重組質(zhì)粒(pT-L)。實驗結(jié)果如下:通過重組PCR技術(shù)獲得的融合基因eGFP.CDVN、P—M和L的片段分別為2292bp、1501bp和6384bp,重疊區(qū)域完全重合,未發(fā)生突變及錯位。本研究成功構(gòu)建融合基因片段,

6、為狂犬病病毒SRV9株全長eDNA的構(gòu)建以及RV減毒重組基因疫苗的研究探索條件。關(guān)鍵詞:狂犬病病毒SRV9:結(jié)構(gòu)基因:犬瘟熱N蛋白基因;eGFP基因;重組PCR萬方數(shù)據(jù)CloningStructuralGenesofRabiesVirusandConstructiononRecombinantPlasmidwithGeneNinCanineDistemperVirusandeGFPGeneAbstractThetotdRNAWaSextractedfromculturedrabiesvirusSRV9byB

7、HK-21cell.TheNgene,Pgene,MGene,Ggene,LIandL2genefromthetotalRNAwereamplifiedbyreversePCR(RT-PCR)andligatedintopMDl9·Tvectors.Theamplifiedfragmentswere1352bp(nucleoproteingene,Ngene),893bp(phosphoproteingene,Pgene),608bp(matrixproteingene,Mgene),1574bp(glyc

8、oproteingene,Ggene),3372bp(1argeproteingenel,L1gene)and3012bp(1argeproteingene2,L2gene),respectively.TheresultsofsequencingandcomparedwithSADB19sequencewereshownthenucleotidehomologyofNgene,Pgene,Mgene,Ggene,

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