phbvhhx支架內(nèi)人臍帶間充質(zhì)干細胞對小鼠肝損傷修復的研究

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2、于保密的論文,按照保密的有關(guān)規(guī)定和程序處理。本論文屬于:保密(),在年解密后適用本授權(quán)聲明。不保密()。(請在以上括號內(nèi)打“√”)作者簽名:導師簽名:日期:年月日日期:年月摘要摘要臍帶間充質(zhì)干細胞(UC-MSCs)是一種具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,經(jīng)合適條件誘導后,可分化為多種特定的功能細胞。作為理想的種子細胞來源,UC-MSCs已被廣泛應用于組織工程中治療多種人的疾病。本研究從人臍帶的沃頓氏膠中分離出了具有成脂、成骨和成軟骨多向分化潛能的臍帶間充質(zhì)干細胞,并探討了其向肝細胞方向分化的潛能和對小鼠肝損傷修復的促進作用。采用添加有HGF和FGF-4這兩種生長因子的分

3、化誘導液對UC-MSCs進行體外誘導分化21天后,免疫細胞化學檢測顯示:分化后的細胞表達了肝細胞的3種特異性蛋白標志物:AFP、ALB和CK-18;PAS染色法顯示分化的細胞顯紫紅色,已具有了糖原合成能力;LDL吸收檢測還表明分化的細胞具有脂蛋白吸收能力。這些結(jié)果證實:本研究分離得到的UC-MSCs具有向肝細胞方向分化的潛能。為了進一步探討UC-MSCs在肝病組織工程中的應用,本研究將UC-MSCs接種于新型的PHBVHHx多孔支架內(nèi),構(gòu)建成細胞-支架復合物,移植到經(jīng)CCL4肝損傷的小鼠模型內(nèi)。結(jié)果顯示:與空支架移植組及未移植的CCL4損傷組小鼠相比,在移植14天和30天后,

4、細胞-支架復合物移植組小鼠的谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和總膽紅素(TB)水平都有了明顯的下降,血清白蛋白(ALB)水平則有所回升;H&E染色顯示小鼠的肝組織結(jié)構(gòu)逐漸恢復,壞死細胞和炎癥細胞大量減少;Masson染色顯示膠原纖維明顯被降解。以上結(jié)果表明:UC-MSCs對小鼠的肝損傷修復具有明顯的促進作用,采用PHBVHHx支架構(gòu)成的細胞-支架復合物在小鼠體內(nèi)具有良好的生物相容性,可能成為未來肝組織工程的一個合適選擇。關(guān)鍵詞:臍帶間充質(zhì)干細胞;PHBVHHx;肝損傷;組織工程IAbstractAbstractUmbilicalcordmesenchymalstemcells(UC-MS

5、Cs),akindofadultstemcells,canself-renewandaremulti-potential.Aftertheyarestimulatedbycertainfactors,theycandifferentiateintomanyfunctionalcells.Itisatypeofidealseeding-cellsfortissueengineering.Inthisstudy,weisolatedUC-MSCsfromhumanumbilicalcordWharton’sjelly,andconfirmedthattheycoulddiffer

6、entiateintoadipocytes,osteoblasts,andchondrocytesunderdifferentconditions.AfterUC-MSCswereculturedinthemediumcontainingHGFandFGF-4for21days,weanalysedthehepaticdifferentiationofUC-MSCsbyimmunocytochemistry(ICC),periodicacidSchiff(PAS)stainingandlowdensitylipoprotein(LDL)-uptakingassay.ICCsh

7、owedthatthecellsexpressedhepatocyte-specificmarkersAFP,ALBandCK-18.PASstainingshoweddifferentiatedUC-MSCsstoredglycogen.LDL-uptakingassayprovedthattheywereabletouptakeLDL.TheseresultsshowedthatUC-MSCscoulddifferentiateintohepatocytesinvitro,andUC-MSCshad

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