人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞定位修復(fù)四氯化碳誘導(dǎo)小鼠肝損傷的研究

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1、２１學(xué)校代碼１０１２９分類號(hào)糾５．ＵＤＣ６０２學(xué)號(hào)２０１２３１６００１博±學(xué)位論文人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞定位修復(fù)四氣化碳誘導(dǎo)小鼠肝損傷的研究ＨｕｍａｎＡｍｍｏｔｉｃＭｅｓｅｎｃｈｍａｌＳ化ｍＣｅｌｌｓＡｍｅｌｉｏｒａ化ＣａｒｂｏｎｙＴｅｔｒａｃｈ－ｓｅｌｏｒｉｄｅＩｎｄｕｃｅｄＬｉｖｅｒＤａｍａｇｅｉｎＭｏｕ申請(qǐng)人：叢姍學(xué)科ｎ類：農(nóng)學(xué)＇？、／可學(xué)利專Ｈ：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)研究方向：動(dòng)物組巧化胎與發(fā)育生物學(xué)３指導(dǎo)教師：曹貴方教授ＩＩ論文提交日期二〇－五年六月：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)

2、聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究王作及取得的硏究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加Ｗ標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包括為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料一，與我同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處一，本人承擔(dān)切相關(guān)責(zé)任。－．日期．＜＾論文作者簽名：苗姆：如巧５內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人完全了解內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即；研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知

3、識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部口或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？晒紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容（保密內(nèi)容除外），采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名／日期：可一／（、摘要肝臟是人體內(nèi)功能最多的代謝和解毒器官，具有多種生理功能參與體內(nèi)消化、代謝、解毒和免疫等過(guò)程，因此，肝臟損傷可引起動(dòng)物和人體的衰老病變和一其化疾病的發(fā)生，。目

4、前嚴(yán)重的肝臟疾病目前還沒(méi)有找到種完全能治愈的措施和治療方法。由于千細(xì)胞具有自我更新和多向分化潛能，有望為干細(xì)胞移植性治療提供新來(lái)源，是病變組織器官損傷修復(fù)的理想首選細(xì)胞。近幾年研究者們主要將目光集中在胎盤(pán)來(lái)源的羊膜組織上，不僅其獲得取材方便、來(lái)源廣泛、增殖能力強(qiáng)、免疫原性低，最重要是不受醫(yī)學(xué)倫理道德限制的優(yōu)點(diǎn)，送也是比豚胎干細(xì)胞應(yīng)用更廣泛的主要原因。羊膜包含兩種細(xì)胞即人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞和羊膜上皮細(xì)胞，ａｎａｍｎｉｏｎｍｅｓｅｎｃｈｍａｌｃｅｌｌｓ其中人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞（ｈｕｍｙ，ｈＡＭＳＣｓ起源中麻層屬于成體干細(xì)胞，具備間充質(zhì)干細(xì)胞特性同時(shí)還具有

5、廝胎）干細(xì)胞特性，此外ｈＡＭＳＣｓ還具有在體外特定條件下向內(nèi)、中、外Ｈ個(gè)胚層分化潛能，是干細(xì)胞移植和再生醫(yī)學(xué)的種子細(xì)胞。１ｈＡＭＳＣｓ，培養(yǎng)并、經(jīng)過(guò)族蛋白酶和Ｉ型膠原酶共同消化羊膜組織獲得、觀察細(xì)胞生長(zhǎng)特性：再通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)、形態(tài)特征、解析分裂中期的染色體二氨基聯(lián)苯胺（ＤｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅＳｔａｉｎｉｎｇ，ＤＡＢ）染色、免疫巧光染色、流式細(xì)胞術(shù)分析表面抗原二麻層分化和ＲＴ－ＰＣＲ檢測(cè)等方法對(duì)培養(yǎng)的細(xì)、定向誘導(dǎo)胞進(jìn)行鑒定，從人羊膜組織中分離得到純度很高的間充質(zhì)干細(xì)。試驗(yàn)結(jié)果表明，ｅｎｔｉｎ）ＤＡＢ染色呈現(xiàn)淺紅色陽(yáng)胞繞過(guò)免疫組化波形

6、絲蛋白（ｖｉｍ性表達(dá)；免疫焚光檢測(cè)表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記Ｖｉｍｅｎｔｉｎ和麻胎干細(xì)胞表面標(biāo)記ＳＳＥＡ－４定細(xì)胞強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞表面抗原ＣＤ２９、ＣＤ４９ｄ、；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)ＣＤ７３，不表達(dá)造血干細(xì)胞表面抗原ＣＤ３４、ＣＤ４５和人白細(xì)胞免疫抑制因子ＨＬＡ－ＤＲ經(jīng)過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)ＲＴ－ＰＣ民檢測(cè)在體外特定條件下可成功誘導(dǎo)分化；為脂肪細(xì)胞。結(jié)果表明ｈＡＭＳＣｓ可巧、成骨細(xì)胞、神經(jīng)樣細(xì)胞和膜島樣細(xì)胞體外成功分離、純化、增殖培養(yǎng)并保持穩(wěn)定的遺傳和生物特性，還具有體外Ｈ胚層分化潛能。２、Ｗ四氯化碳，將活體染料Ｄｉｒ和簇（ＣＯＵ）誘導(dǎo)小鼠肝損傷為受試模型基巧

7、光素乙醜乙酸（ＣＦＳＥ）標(biāo)記的ｈＡＭＳＣｓ通過(guò)尾靜脈注射移植到肝損傷小鼠，觀察ｈＡＭＳＣｓ在小鼠體內(nèi)遷移歸巢情況及移植后治巧效果。結(jié)果表明成功建立ｉｒＣＦＳＥ標(biāo)記ｈＡＭＳＣｓ分別通過(guò)活體成像和冰凍切片免疫小鼠肝損傷模型，Ｄ和巧光觀察移植ｈＡＭＳＣｓ可［＾＾遷移歸巢到受損的肝臟，ｈＡＭＳＣｓ移植后對(duì)受損?。崳?，鼠肝功、組織病理學(xué)義分泌白蛋白等方面都有修復(fù)作用，肝損傷程度明顯改善治療效果顯著。３、實(shí)時(shí)巧光定量和蛋白印跡技術(shù)檢測(cè)表明ｈＡＭＳＣｓ移植后可提高受損肝組