熱毒寧注射液對細(xì)菌內(nèi)毒素性脂多糖致熱大鼠解熱作用探究

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1、熱毒寧注射液對細(xì)菌內(nèi)毒素性脂多糖致熱大鼠解熱作用探究［摘要］該實驗觀察熱毒寧注射液(RDN)對細(xì)菌內(nèi)毒素性脂多糖(LPS)發(fā)熱大鼠的解熱作用及對中樞發(fā)熱介質(zhì)的影響。將大鼠隨機(jī)分為空白對照組、模型組、安乃近組、熱毒寧注射液高、低劑量組(12,6mL?kg-l)o除對照組外，所有大鼠均腹腔注射脂多糖(LPS,80ug?kg-l)觀察各組體溫變化，并采用雙抗體夾心ELSIA法測定發(fā)熱高峰大鼠下丘腦中環(huán)磷酸腺昔(cAMP)含量和肺組織中髓過氧化物酶(MP0)含量。熱毒寧注射液高劑量組能明顯降低發(fā)熱大鼠體溫的升高程度，并且能夠降低發(fā)熱大鼠下丘腦中cAMP含量和肺組織中MP0含量

2、。熱毒寧注射液有明顯的解熱作用，其作用機(jī)制可能主要與減少下丘腦中cAMP含量和肺組織中MP0含量有關(guān)。［關(guān)鍵詞］熱毒寧注射液；解熱；cAMP；MP0發(fā)熱是指機(jī)體在致熱原的作用下，激活體內(nèi)的單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生內(nèi)生致熱原(EP)作用于下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞，使產(chǎn)熱增加，散熱減少而引起的調(diào)節(jié)性體溫升高［1］,是外周免疫系統(tǒng)和中樞共同作用的結(jié)果［2］。熱毒寧注射液是提取梔子、青蒿、金銀花中的有效組分制備而成的復(fù)方中藥制劑,臨床用于治療急性上呼吸道感染外感風(fēng)熱證。金銀花對酵母和內(nèi)毒素所致大鼠發(fā)熱與2,4-二硝基苯酚所致小鼠發(fā)熱有明顯的解熱作用，并且能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹［3-5］o

3、青篙［6］與其他藥物配伍治療SARS病人高熱不退具有良好的效果，且青蒿中東淺若內(nèi)酯(scopoletin)對正常體溫及內(nèi)毒素性發(fā)熱家兔體溫均有顯著的降低作用［7］。臨床上熱毒寧注射液具有治療外感風(fēng)熱的功效［8］。本實驗觀察熱毒寧注射液對細(xì)菌內(nèi)毒素性脂多糖(LPS)發(fā)熱大鼠的解熱作用，并探討其可能的解熱作用機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。1材料與方法1.1動物SPF級SD大鼠，雄性，體重(200±20)g,由廣東省實驗動物監(jiān)測所提供，生產(chǎn)許可證號SCXK(粵)2006-0015o飼養(yǎng)環(huán)境：室溫(23±2)°C,相對濕度(60+10)%,正常飼養(yǎng)3d后供試。1.2試劑及儀

4、器熱毒寧注射液由江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司提供，批號100906o熱毒寧注射液的化學(xué)組成通過高效液相色譜法(藥典2005年版一部附錄VID)測定，HPLC指紋圖譜由姚新生院士課題組提供?；衔锝Y(jié)構(gòu)的鑒定使用分光光度計(Waters,USA),質(zhì)譜儀(Bruker,USA),核磁共振分光儀(Bruker,USA)。熱毒寧注射液中包含10種主要的化合物，分別為新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、斷馬錢子酸、咖啡酸、梔子昔、斷氧馬錢子昔、異綠原酸氏異綠原酸C和異綠原酸A,綠原酸和梔子昔為其解熱作用的有效成分。安乃近注射液購自天津藥業(yè)焦作有限公司，批號10052731c脂多糖（LPS）

5、購自Sigma公司，批號13H4048。cAMPELISA試劑盒購自美國ADL公司。MP0試劑盒購自南京建成生物工程研究所。體溫計產(chǎn)自上海華辰醫(yī)用儀表有限公司；冷凍離心機(jī)為德國Sartorious公司產(chǎn)品；酶標(biāo)儀為芬蘭ThermoLabsystems公司產(chǎn)品。1.3動物的篩選SD大鼠在試驗環(huán)境中適應(yīng)3d,自由進(jìn)食飲水。實驗前3d將大鼠置于實驗環(huán)境中摸擬實驗操作（包括捉拿、固定、安放溫度計）以使其適應(yīng)實驗條件，每日用體溫計測肛門溫度2次（體溫計插入肛門2cm,測定溫度時擠出糞便），選取體溫變化不超過0.5°C的大鼠作為實驗用動物［9］。1.4大鼠LPS所致發(fā)熱模型的建立

6、將合格大鼠（體溫變化不超過0.5￡的大鼠）隨機(jī)分為對照組和LPS發(fā)熱組，每組6只。用無菌生理鹽水將LPS配置成801經(jīng)腹腔注射入大鼠體內(nèi)，對照組大鼠腹腔注射等體積的無菌生理鹽水作為空白對照，注射LPS開始持續(xù)觀察并記錄大鼠體溫變化，每lh測定體溫1次，連續(xù)測定10h,記錄2組大鼠體溫的變化（AT,°C）o1.5動物分組、給藥及體溫變化的測定將合格大鼠（體溫變化不超過0.51的大鼠）隨機(jī)分為5組，每組10只：正常對照組、模型組、安乃近陽性對照組、熱毒寧注射液高、低劑量組（12,6mL?kg-1,相當(dāng)人臨床等效劑量4,2倍）。各組給藥組大鼠通過腹腔注射給予藥物，模型組給予

7、等體積無菌生理鹽水。給藥lh后，除空白組外所有大鼠均腹部注射LPS80ug?kg-1,空白組給予等體積無菌生理鹽水。注射LPS開始持續(xù)觀察并記錄大鼠體溫變化，每lh記錄體溫1次，連續(xù)記錄7h,以每1h的動物體溫與基礎(chǔ)體溫的差值（AT,￡）為觀察指標(biāo)。1.6下丘腦cAMP和肺臟MP0含量測定發(fā)熱高峰6h腹腔注射10%水合氯醛使大鼠麻醉，斷頭法處死，于冰浴下迅速取出肺臟及全腦，于視交叉與灰結(jié)節(jié)之間取下丘腦組織。稱取50mg新鮮下丘腦組織，加入細(xì)胞裂解液0.5mL,室溫裂解30mine超聲裂解1min,4°C13201Xg離心15min,取上清液采用雙抗體