資源描述：
《副豬嗜血桿菌的分離鑒定及診斷方法與滅活疫苗的研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學學位論文獨創(chuàng)性盧明及使用授權(quán)書學位論文龜如需保密，解密時間年月日是否保密獨創(chuàng)性聲明本人聲明所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果．盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學或其他教育機構(gòu)的學位或證書而使用過的材料，指導教師對此進行了審定．與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明，并表示了謝意．研究生簽名：蓉地遼王時聞：蹦年j月弓口日學位論文使用授權(quán)書本入完全了解“華中農(nóng)業(yè)大學關(guān)于保存，使用學位論文的規(guī)定”，即學生必須按照學校要
2、求提交學位論文的印刷本和電子版本；學校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版，并提供目錄撿索和閱覽服務(wù)，可以采用影印?？s印或掃描等復制手段保存．匯編學位論文．本人同意華中農(nóng)業(yè)大學可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表，傳播學位論文的全部或部分內(nèi)容．注：保密學位論文在解密后適用于本授權(quán)書．學位論文作者戳黜旺導眺：牌彥簽名日期：五舊6年j月．扣日簽名日期：∥卜“年r月弓／日注：請將本表直接裝訂在學位論文的扉頁和目錄之間靜J豬嗜缸桿菌的分離鑒定及滅活疫苗的研究摘要副豬嗜血桿菌(Haemophilusparasuis，HPS)引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎；“隨著世界養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)
3、展，該病已成為全球范圍內(nèi)影響?zhàn)B豬業(yè)的一種重要細菌性疾病。我國足一個養(yǎng)豬大國，但日自口仍沒有對副豬嗜血桿菌進行系統(tǒng)研究的報道。本研究對副豬嗜血桿菌的病原學、流行病學、診斷方法和滅活疫苗進行研究，為我國副豬嗜血桿菌病的基礎(chǔ)研究以及我國對于該病的診斷、預防與控制奠定基礎(chǔ)，主要研究內(nèi)容如下：1．副豬嗜血桿菌的分離鑒定及關(guān)于我國的病原學調(diào)查從全國十五個省市送本室檢測的疑似患多發(fā)漿膜炎，關(guān)節(jié)炎和腦膜炎的病料中分離到281株細菌，通過細菌形態(tài)，培養(yǎng)特性、生化特性及PCR鑒定最終確定為副豬嗜血桿菌。對從2003年6月到2004年12月送我室檢測的828例病料進行細菌分離鑒定，結(jié)
4、果有183例分離出副豬嗜血桿菌，分離率高達22．1％，表明該菌在我國廣泛流行。對本室分離的所有副豬嗜血桿菌按瓊脂擴散試驗和間接血凝試驗血清學分型方法進行血清型鑒定，結(jié)果表明我國以血清4型(24．2％)和5型(19．2％)最為流行，其次為13型(12．5％)、14型(7．1％)和12型(6．8％)，另外有12．1％的分離菌株不能進行血清學分型。該結(jié)果為我國對丁二副豬嗜血桿菌病的預防與控制提供了參考依據(jù)。2．副豬嗜血桿菌生物學特性的研究以本室分離鑒定的副豬嗜血桿菌MD0322株和SH0165株為代表菌株對該菌的各種生物學特性進行研究。對不同固體培養(yǎng)基的比較發(fā)現(xiàn)該菌在
5、TSA固體培養(yǎng)基和n彤SN固體培養(yǎng)基上生長最好，對不同液體培養(yǎng)基的比較發(fā)現(xiàn)該菌在TSB液體培養(yǎng)基、TMB液體培養(yǎng)基和BHI液體培養(yǎng)基中生長最好。副豬嗜血桿菌在TSB液體培養(yǎng)基中的生長曲線顯示培養(yǎng)16～18h活菌數(shù)達到最高峰，隨后大幅下降。副豬嗜血桿菌在生理鹽水、磷酸鹽緩沖液和TSB液體培基中4"C保存的存活曲線顯示該菌在以上介質(zhì)中每保存一天時間其活菌數(shù)均要下降一個對數(shù)值左右，說明副豬嗜血桿菌通常不能采用單純的平板菌落計數(shù)法活菌計數(shù)．本研究提出的分光光度計測定法合理地解決了副豬嗜血桿菌即時計數(shù)的問題，為該菌各種動物實驗的開展奠定了基礎(chǔ)。3．副豬嗜血桿菌抗體間接血凝
6、試驗檢測方法的建立及我國血清學調(diào)查將副豬嗜血桿菌經(jīng)超聲波破碎處理后的產(chǎn)物致敏醛化鞣酸化紅細胞，建立間接血凝試驗用于檢測副豬嗜血桿菌抗體。采用該法對副豬嗜血桿菌15種血清型標準血清的檢測結(jié)果都為陽性；對豬瘟、口蹄疫、圓環(huán)病毒、細小病毒、豬偽狂犬、豬繁殖與呼吸綜合征、豬氣喘病，豬鏈球菌、豬肺疫巴氏桿菌、豬傳染性萎縮性鼻炎及胸膜肺炎等病原的標準陽性血清的檢測結(jié)果全為陰性，具有良好的特異性。本檢測畢中農(nóng)業(yè)大學博士學位論文方法最低可檢測出l：2¨倍稀釋的高免血清，具有良好的敏感性。按本方法制備的間接血凝診斷試劑保存期可達6個月。本研究為副豬嗜血桿菌抗體的檢測提供了一種簡捷
7、、靈敏和特異的方法。采用該間接血凝試驗檢測方法從2005年3月到2005年12月對全國七個省份芡血清1665份的抽檢結(jié)果陽性784份，陰性881份，陽性率47．1％，從抗體方面表明副豬嗜血桿菌病在我國各地流行較普遍。4．副豬嗜血桿菌病滅活疫苗的研究4．1副豬嗜血桿菌病滅活疫苗制備與檢驗用菌株的篩選根據(jù)本室完成的副豬嗜血桿菌流行病學調(diào)查結(jié)果，以我國最流行的血清4型和5型菌株研制疫苗，通過對臨床資料及動物試驗結(jié)果的比較篩選出毒力較強，免疫原性較好的菌株即血清4型MD0322抹和血清5型SH0165株作為疫苗候選菌株，毒力穩(wěn)定性和免疫原性穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明兩株菌種連傳
8、25代后仍保持穩(wěn)定，因而
