副豬嗜血桿菌的分離鑒定與三價(jià)滅活疫苗的初步研制

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2、’．；ｒ－聲＾－勢(shì)々＾．齊指導(dǎo)教師姓名；高巧教授．揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州，２巧００９?。绠a(chǎn)，＼一三、、一■，、．：■申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別■：碩±學(xué)科專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：動(dòng)物免疫學(xué)；論文提交日期；２０１５年４月論文答辯日期：２０１５年６月…２０１５年６月學(xué)位授予單位：揚(yáng)州大學(xué)學(xué)位授予日期：：＇，ｒ，答辯委員會(huì)主席：Ｔ伊．＜污乂＾Ｖ＂．．．戶(hù)，礙於顯爭(zhēng)聲私纖冷形＇片，丸：秦暫旅鈴滅刺副豬嗜血桿菌的分幫鑒定與Ｈ價(jià)滅活疫苗的初步硏制．Ｉｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉ

3、ｏ打ｏｆ好幻６靡少片舶Ｓ公幻尸。通＊５ａｎｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｒｉｖａｌｅｎｔｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄｂａｃｔｅｒｉｎ研究生：易新?。崳妼?zhuān)業(yè)：動(dòng)物免疫學(xué)導(dǎo)師：高疲教授揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院２０１５年６月易巧健：副豬嗜血桿菌的分離鑒定與王價(jià)滅活疫苗的初步研制Ｉ副豬嗜血桿菌的分離鑒定與Ｈ價(jià)滅活疫苗的初步硏制研究生：易新?。崳妼?dǎo)師：髙核教授摘要副豬嗜血桿菌常存在于健康豬的上呼吸道，屬于己斯德菌科嗜血桿菌屬，在臨床上主要引起豬的多發(fā)性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎。近年來(lái)國(guó)內(nèi)養(yǎng)

4、豬場(chǎng)副豬嗜血桿菌病的日益嚴(yán)峻，對(duì)各養(yǎng)殖場(chǎng)造成嚴(yán)重的損失。本研究主要對(duì)江蘇省和安徽省養(yǎng)豬場(chǎng)的病死豬和健康豬進(jìn)行副豬嗜血桿菌的分離鑒定，為副豬嗜血桿菌的防治提供依據(jù)。同時(shí)，本室巧步研制副猜嗜血桿菌血清４型、５型和１２型Ｓ價(jià)滅活疫苗，用ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠對(duì)其進(jìn)行免疫保護(hù)力的評(píng)價(jià)。１副豬嗜化桿菌的分離鑒定在揚(yáng)州大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院和揚(yáng)州某屠宰場(chǎng)進(jìn)行樣品采集，將其接種到巧克力培養(yǎng)基上培養(yǎng)，。對(duì)ＰＣＲ檢測(cè)陽(yáng)性的菌株進(jìn)行純化并保存通過(guò)ＰＣＲ檢測(cè)副豬嗜血桿菌的１６ＳｒＲＮＡ。通過(guò)ＰＣＲ鑒定之后，從病死豬中分離到８株副豬嗜血桿菌；從健康豬

5、中分離到２６株。Ｈ副豬嗜血桿菌，其分離率為７．１２％對(duì)其中的株副豬嗜血桿茵進(jìn)行基因測(cè)序，其測(cè)序結(jié)果與國(guó)內(nèi)外分離株１６ＳｒＲＮＡ基因序列同源性均能達(dá)到９９％Ｗ上。對(duì)所有分離株用玻板凝集進(jìn)行血清分型。在病死豬的分離株中血清５型３株、血清１２型２株。在健康豬的分離株中血清４型４株（１５．３８％）、、血清１４型１株及不可定型２株〇５型１株（３．８５％）、１１型３株（１１．５４／〇）、１２型１０株（３８．４６％）、１３型１株（３．８５％）及未定型菌株７株（２６．％％）。２副豬嗜血桿菌Ｈ價(jià)滅活疫苗的初步

6、研制用副豬嗜血桿菌血清４型、５型和１２型分離株分別對(duì)豚鼠進(jìn)行腹腔攻毒。結(jié)果血清５１２）型和１２型菌株攻毒豚鼠全部死亡；血清４型菌株攻毒豚鼠死亡只（攻毒只。對(duì)死亡豚鼠進(jìn)行剖檢發(fā)現(xiàn)腹腔積液和胸腔積液及少量纖維素樓出，與副豬嗜血桿菌在病豬的癥狀相似。用Ｈ個(gè)不同劑量的副豬嗜血桿菌血清４型、５型和口型分離株分別對(duì)ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠進(jìn)行腹臟攻毒Ｘ９。結(jié)果Ｈ個(gè)血清型的茜株攻毒劑量達(dá)到５．０１０ＣＦＵ時(shí)，ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠均死亡。９ｘ而攻毒劑量為ｌ．ＯｌＯＣＦＵ時(shí)，血清４型巧５型菌株攻毒小鼠均死亡１只（攻毒２只），而血清１２型

7、菌株攻毒小鼠未死亡。揚(yáng)州大學(xué)碩壬學(xué)位論文ｎ９（含血清型菌襪各ｌｘ）Ｈ價(jià)滅活疫苗２（含用Ｓ價(jià)滅活疫苗１３個(gè)．ＯｌＯＣＦＵ、３個(gè)血９９清型菌株各２．〇ｘｌ〇ＣＦＵ）、Ｈ價(jià)滅活疫苗３（含３個(gè)血清型菌株各４．〇ｘｌ〇ＣＦＵ）及商品滅活疫苗分別對(duì)ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠進(jìn)斤皮下免疫２次，二次免疫后１４天，對(duì)各小鼠進(jìn)行腹腔攻毒。結(jié)果Ｈ價(jià)滅活苗免疫組１和２與商品疫苗免疫組對(duì)４型和５型菌株的抵抗力相當(dāng)，保護(hù)率為。４０％左右。但在對(duì)１２型菌株的抵抗力上，Ｈ價(jià)滅活疫苗免疫組１和２的保護(hù)率達(dá)到６０／。，而商品疫苗的保護(hù)率只有２０％

8、。Ｈ價(jià)滅活疫苗免疫組３對(duì)４型和５型菌株的免疫保護(hù)率要比商品疫苗免疫組保護(hù)率高２０％，保護(hù)率為６０％。在對(duì)１２型菌株的抵抗力上，Ｈ價(jià)滅活疫苗免疫組３的保護(hù)率要