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《杏仁核點(diǎn)燃大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬mirna表達(dá)譜與神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性研究》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)目錄中文摘要??????????????????????????????1英文摘要??????????????????????????????????·3符號(hào)說(shuō)明????????????????????????????????“5前言??.??????????????????????????????·????··6刖舌??”??????????????????????????????????”材料與方法?????????????????????????????????8結(jié)果????????????????????????
2、????????????”18討論????????????????????????????·????????·21結(jié)論??????“??????·?????··??·???????????????··26附圖表??????????????????????????????????··27參考文獻(xiàn)????“·???·36綜述····?????··??”······???··??一?”·-”?·:··?一·?···???··?“?···”?·42致謝??·????·????·??·一··n????”·?????????··??”???
3、?57攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄???????????????????????·58原創(chuàng)性聲明????????????????????????????????·59萬(wàn)方數(shù)據(jù)泰山醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文杏仁核點(diǎn)燃大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)后海馬miRNA表達(dá)譜與神經(jīng)元凋亡的相關(guān)性研究研究生:孫臻專業(yè):老年醫(yī)學(xué)導(dǎo)師:譚蘭教授中文摘要目的癲癇是中樞神經(jīng)系統(tǒng)常見(jiàn)病,目前影響著全球O.5%~1%的人群。選擇性神經(jīng)元死亡和苔蘚纖維芽生等病理生理過(guò)程與癲癇的發(fā)生及發(fā)展有關(guān)。micmRNA(miRNA)是一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼小RNA,它通過(guò)誘導(dǎo)沉默復(fù)
4、合體形成來(lái)降解靶mRNA,或者阻遏靶mRNA的翻譯。最近越來(lái)越多的文獻(xiàn)報(bào)道,miRNA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著極為重要的作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立杏仁核點(diǎn)燃癲癇持續(xù)狀態(tài)模型的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)探討海馬ndRNA表達(dá)譜的變化,并且對(duì)癲癇持續(xù)狀態(tài)后差異表達(dá)的miRNA與海馬神經(jīng)元凋亡的關(guān)系進(jìn)行了評(píng)估。研究方法1、首先選用6~8周齡健康雄性SD大鼠,建立杏仁核點(diǎn)燃大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)模型,于造模成功后24小時(shí)提取大鼠腦組織海馬區(qū)miRNA,采用高通量測(cè)序技術(shù)研究癲癇持續(xù)狀態(tài)后大鼠海馬區(qū)腦組織與正常大鼠海馬區(qū)腦組織中miRNA表達(dá)譜的差異。2
5、、隨后將篩選出的差異表達(dá)明顯的6個(gè)miRNA用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RcalqimeQuantitaliveReverseTranscriptionPolymeraseChainReaction,qRT-PCR)進(jìn)行驗(yàn)證。3、應(yīng)用靶基因預(yù)測(cè)軟件(RNAhybrid和miRand)對(duì)以上6個(gè)miRNA的目的候選靶mRNA進(jìn)行了預(yù)測(cè),并使用KEGG(KyotoEncyclopediaofGenesandQ埴賊n懿)進(jìn)行通路分析。4、最后檢測(cè)此6個(gè)miRNA在癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時(shí)間點(diǎn)(4小時(shí),24小時(shí),l周和3周)的動(dòng)態(tài)變化,與
6、此同時(shí)應(yīng)用Nissel染色和TUNEL(Terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPend-labelingassay)染色檢測(cè)癲癇持續(xù)狀態(tài)后不同時(shí)間點(diǎn)海馬神經(jīng)元生存和凋亡情況,進(jìn)一步評(píng)估篩選出的miRNA是否與癲癇持續(xù)狀態(tài)后神經(jīng)元凋1萬(wàn)方數(shù)據(jù)泰山醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文亡有關(guān)。結(jié)果l、杏仁核點(diǎn)燃癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠和對(duì)照組證常大鼠海馬組織差異表達(dá)的miRNA:在癲癇持續(xù)狀態(tài)后24小時(shí)檢測(cè)出差異表達(dá)的miRNA共37個(gè),其中上調(diào)的miRNA有34個(gè),下調(diào)的有3個(gè)。進(jìn)一步篩選出在癲癇持續(xù)狀
7、態(tài)后變化大于2倍的(P<0.01且P≠0)6個(gè)miRNA(miR-874-3p,miR-20a-5p,miR-345—3p,miR-365—5p,miR-764—3pandmiR-99b-3p),在以上6個(gè)篩選出的miRNA中,上調(diào)的miRNA表達(dá)差異最大的是miR-879.5p(4.177倍),差異最小的是miR-764-3p(2.078倍),下調(diào)大于2倍的是miR-99b-3p。2、采用qRT-PCR對(duì)結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證:將篩選出的變化明顯的6個(gè)miRNA進(jìn)行qRT-PCR驗(yàn)證,miR-974--3p,miR-20a-5p,miR
8、-345—3p,miR-365—5p,miR-764-3p的表達(dá)量與正常對(duì)照組相比明顯增高,而miR-99b-3p的表達(dá)量明顯下降,此與高通量測(cè)序結(jié)果一致。3、靶基因預(yù)測(cè):利用RNAhybrid和miRand兩個(gè)靶基因預(yù)測(cè)軟件對(duì)篩選出的6個(gè)miRNA的靶mRNA