資源描述：
《草魚(yú)(ctenopharyngodon idella)hsp90、wap65基因的克隆、表達(dá)特性及功能分析》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、南昌大學(xué)碩士學(xué)位論文草魚(yú)（Ctenopharyngodonidella)Hsp90、Wap65基因的克隆、表達(dá)特性及功能分析姓名：趙鳳云申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：水生生物學(xué)指導(dǎo)教師：胡成鈺20110608摘要草魚(yú)(Ctenopharyngodonidellus)Hsp90(CiHsp90，GU258544)克隆于草魚(yú)肝腎eDNA文庫(kù)。CiHsp90全長(zhǎng)為2793bp。CiHsp90有廣譜的本底組織表達(dá)，經(jīng)34。C短暫誘導(dǎo)后，其表達(dá)水平有一定的上調(diào)。為了解CiHsp90的功能，一方面，克隆了ATPase結(jié)構(gòu)域eDNA與載體連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行4℃冷、42"12熱激保護(hù)實(shí)驗(yàn)。
2、另一方面，原核表達(dá)、純化獲得該目的多肽P朋Pasc，將n冊(cè)敬進(jìn)行檸檬酸合成酶凝集實(shí)驗(yàn)。CiHsp90除了對(duì)大腸桿菌有冷，熱保護(hù)作用外，在高溫狀態(tài)時(shí)能夠降低檸檬酸合成酶的凝集程度。Wap65是機(jī)體參與溫度調(diào)節(jié)和免疫應(yīng)答反應(yīng)的一種應(yīng)激蛋白，它在魚(yú)類適應(yīng)變溫生活等方面起重要作用。本文在經(jīng)PolyI：C誘導(dǎo)的草魚(yú)肝腎eDNA文庫(kù)中篩選并克隆了1個(gè)Wap65(HM629798)。草魚(yú)Wap65全長(zhǎng)eDNA為1510bp。進(jìn)化樹(shù)顯示，草魚(yú)Wap65與斑點(diǎn)叉尾鲴Wap65-2進(jìn)化關(guān)系最近。定量PCR研究草魚(yú)Wap65的表達(dá)特征，結(jié)果表明：Wap65在肝中有較強(qiáng)的本底表達(dá)，而在脾、腎、腦
3、和腸等組織中該基因表達(dá)非常微弱。34"C熱激2h后，在脾臟中，Wap65的表達(dá)量有一定的上調(diào)；在肝臟中該基因的相對(duì)表達(dá)量大量增加，而在其他受檢組織中Wap65的表達(dá)無(wú)明顯變化。PolyI：C誘導(dǎo)以后，在脾臟中，Wap65的表達(dá)量有一定的上調(diào)；在其他受檢組織中無(wú)明顯變化。LPS誘導(dǎo)以后，在受檢組織中的表達(dá)量都下調(diào)。因此，草魚(yú)Wap65主要在肝臟中表達(dá)。本研究克隆的草魚(yú)Wap65可能是Wap65-2。關(guān)鍵詞：Hsp90；ATPase結(jié)構(gòu)域；Wap65；應(yīng)激蛋白AbstraetAbstractThegrasscarp(Ctenopharyngodonidellus)Hsp90g
4、enewasclonedfrommixedliverandkidneycDNAlibrary(CiHsp90，GU258544)．ThefulllengthsequenceofwhichWas2793bp，containeda5'untranslatedregionof104bpanda3'untranslatedregionof292bp．Theopenreadingframewas2397bpwhichcouldcodea798aminoacidspeptide．Analysisofthededucedaminoacidsequenceindicatedthatthe
5、maturepeptidepossessedanATPasedomain(96-255aa)．TheRT-PCRanalysisshowedthatCiHsp90wasubiquitouslyexpressedatlowerlevelsinalldetectedtissuesandup—regulatedafterheatshockat34℃．TounderstandthefunctiontheATPasedomainofCiHsp90involvinginthermalprotection，anexpressionvectorcontainingitseDNAwasex
6、pressedinE．coliBL21(DE3)plysS．Upontransferfrom37℃to42℃，thesecellsthataccumulatedPATPase(recombinantpeptideoftheATPasedomain)displayedgreaterthermoresistancethancontrolcells．Whileincubatedat4℃fordifferentperiods，itcouldalsoimproveviabilitycomparedwitllcontrolcultures．Theresultsshowedthatth
7、eATPasedomainofCiHsp90couldcontributetoprotectingcellsagainstboththermalextremes．Moreover,weexpressedandpurifiedthepeptideofPATPaseusingforthecitratesynthaseaggregationassays．ItsuggestedthattheATPasedomainofCiHsp90couldreducethelevelofcitratesynthaseaggregationatthe
