黃芪多糖作為佐劑對(duì)乙型肝炎疫苗免疫反應(yīng)影響的研究

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1、SichuanAgriculturalUniversityDissertationforMasterDegreeInfluenceofAstragaluspolysaccharidesasadjuvantontllelmnluneresPonsetohepatitisBVaCClneinIllice-l■·-·-·‘1n●MasterCandidate：XiaobingChenSupervisor：Prof．XianyinZengSpecialty：BiophysicsYa’an，Sichuan，ChinaJun，2010論文獨(dú)

2、創(chuàng)性聲明lIIIIIIIIIIIIII1[IIY180071本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。研肅生躲7蠆山易／沙P’％仰{口年易月叫日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)

3、部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。研究生簽名：導(dǎo)師簽名：雄山乞留璽欏伽i◇年廠月卅日D№年釤月)1日LJ四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2007級(jí)碩士學(xué)位論文摘要乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)引起的一種影響人類健康的世界性傳染病。接種乙肝疫苗是目前控制乙型肝炎感染的最有效的措施，但是傳統(tǒng)的乙型肝炎亞單位疫苗是由乙型肝炎病毒的表面抗原和鋁佐劑組成，鋁佐劑疫苗僅能

4、引起很好的體液免疫反應(yīng)而不能引起有效的細(xì)胞免疫反應(yīng)。佐劑可以增強(qiáng)細(xì)胞免疫和體液免疫，活化T細(xì)胞，上調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá)，增強(qiáng)免疫記憶，并能改變免疫反應(yīng)類型。因此改良佐劑可能增強(qiáng)傳統(tǒng)乙型肝炎亞單位疫苗的免疫反應(yīng)。黃芪多糖(Astragaluspolysaccharides，APS)是中藥黃芪的提取物，具有廣泛的藥理作用，也具有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用。APS可從多個(gè)方面發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用：直接影響免疫細(xì)胞內(nèi)的物質(zhì)代謝，誘導(dǎo)產(chǎn)生相關(guān)的免疫調(diào)節(jié)因子；不僅能夠增強(qiáng)機(jī)體的特異性免疫反應(yīng)，還可以增強(qiáng)非特異性免疫反應(yīng)；既前增強(qiáng)正常機(jī)體的免疫功能，又可調(diào)節(jié)

5、異常機(jī)體的免疫功能。本研究將APS作為乙型肝炎亞單位疫苗的佐劑與疫苗一起免疫昆明白小鼠，研究其對(duì)乙肝疫苗免疫反應(yīng)的影響，尤其是對(duì)細(xì)胞免疫反應(yīng)的影響。實(shí)驗(yàn)選取健康雌性6～8周齡昆明白小鼠35只，體重20---，24g，隨機(jī)分為5組，每組7只，分別為rHBsAg組、rHBsAg+APS組、rHBsAg+aulm組、APS組和對(duì)照組(不進(jìn)行免疫)。初次免疫設(shè)為0天，第14天加強(qiáng)免疫一次，在第21天進(jìn)行免疫學(xué)指標(biāo)的檢測(cè)。主要結(jié)果如下：實(shí)驗(yàn)使用定量ELISA法檢測(cè)IgG水平，用MTT法檢測(cè)T細(xì)胞增殖反應(yīng)，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)體內(nèi)CTL反應(yīng)，結(jié)

6、果發(fā)現(xiàn)APS顯著增強(qiáng)乙肝疫苗誘導(dǎo)產(chǎn)生較高的IgG抗體水平，較強(qiáng)的T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和體內(nèi)CTL殺傷反應(yīng)，表明APS能夠增強(qiáng)乙肝疫苗的免疫反應(yīng)。為進(jìn)一步研究APS作為乙型肝炎亞單位疫苗的佐劑對(duì)免疫反應(yīng)的影響，對(duì)有關(guān)免疫學(xué)指標(biāo)作了進(jìn)一步檢測(cè)。用RT-PCR法檢測(cè)PFP、GraB、FasL和Fas的表達(dá)以及用流式細(xì)胞儀檢測(cè)體內(nèi)細(xì)胞因子的表達(dá)水平，結(jié)果表明APS能夠增強(qiáng)乙肝疫苗上調(diào)PFP、GraB、FasL、Fas和CD8+T細(xì)胞IFN．Y的表達(dá)水平，與體內(nèi)CTL反應(yīng)結(jié)果一致；APS能夠增強(qiáng)乙肝疫苗誘導(dǎo)較高的CD4+T細(xì)胞IFN．Y、I

7、L．2和IL．4的表達(dá)水平，表明APS作為乙肝疫苗的佐劑能夠促進(jìn)機(jī)體Thl型和Th2型免疫反應(yīng)。為進(jìn)一步探討APS作為佐劑增強(qiáng)免疫反應(yīng)的作用機(jī)理，用半定量PT-PCR法對(duì)l四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2007級(jí)碩士學(xué)位論文TLR2、TLR4、TGF．B1和Foxp3的表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明APS能夠很好地增強(qiáng)乙肝疫苗誘導(dǎo)TLR2和TLR4表達(dá)，通過(guò)上調(diào)TLR2和TLR4的表達(dá)激發(fā)協(xié)同刺激分子和相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)參與適應(yīng)性免疫應(yīng)答；APS作為乙肝疫苗的佐劑能夠明顯降低機(jī)體TGF．gl和Foxp3表達(dá)水平，通過(guò)抑制TGF．gl和Foxp3的表達(dá)

8、促進(jìn)機(jī)體免疫反應(yīng)。以上結(jié)果表明，APS作為乙型肝炎亞單位疫苗的佐劑能增強(qiáng)乙肝疫苗的免疫反應(yīng)。本研究初步證實(shí)了APS是一種良好的免疫佐劑，能夠顯著地提高乙型肝炎亞單位疫苗的體液免疫水平和細(xì)胞免疫水平，為乙型肝炎疫苗的研發(fā)提供了有意義的基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)資料。關(guān)鍵詞：黃芪