谷氨酸載體eaat1在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷中的作用

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1、上海醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文谷氨酸載體EAAT1在新生大鼠缺氧缺血性腦損傷中的作用姓名：陶鋒申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：神經(jīng)生物學(xué)指導(dǎo)教師：孫鳳艷2000.5.11．中文摘要答氨酸載體EAATl在毅生丈鼠缺氧缺盔性腦損傷中豹作愚I谷氨酸燕中樞神經(jīng)系統(tǒng)中一種主要的興奮檻神經(jīng)遞質(zhì)，它在突觸可凝性和神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中起重要作用。然而，在腦缺血等病理奈停下，谷氨酸欠量釋放至突觸間隙中，使谷氨酸受體過度興奮而產(chǎn)生興奮蓐作用。大量研究表明：谷氨酸的神經(jīng)毒效應(yīng)是腦缺血后彝綴元死亡姆主要原霉之一，屯參與在新生丸缺氧缺血蛙弦損傷的

2、病理生理過程中。谷氨酸§宅神經(jīng)來稿釋放戇谷氨酸在突舷閼涼表不是逯過酶解失活，而是通過重?cái)z取的機(jī)制被再利用。參與此熏攝取的載體目前被認(rèn)為是存在于紳經(jīng)死和神經(jīng)膠康緞颼壤土鐫高囊壽力鏑依籟烴谷氨酸載體(下稱“谷氨酸載體”)，該載體對(duì)細(xì)胞外谷氨酸濃度的有效譎節(jié)楚維持生理裝態(tài)下谷氯酸毖秘經(jīng)傳遞的必要條鋒。薊餮囂為止，編碼藏種不閑谷氨酸載體妲型(EAATl-5)的cDNA已被克隆，并已異清了英相應(yīng)縋氨基酸序列。與其它亞型相比，EAATl由于其攝取谷氨酸的吃餓較高，被認(rèn)為可能在一些病理狀態(tài)下(如：缺氧缺血)起主要詐用。

3、我們實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)在成年大鼠局灶性光化掌腦缺贏模型上觀察割：缺血半暗區(qū)內(nèi)谷氨酸裁缽GLAST(EAATI)mRNA表達(dá)在缺血后72小時(shí)明顯增加；谷氯酸攝取抑制荊L-trans-PDC呈劑量依賴性增加缺血麝的腦梗塞體積。土述結(jié)果提示：麒缺血詹EAATl表達(dá)增加可能有利于限制細(xì)胞外谷氨酸水平的有害升高，從而減輕腦損傷的程度。)為了進(jìn)一步明確EAATl在缺氧缺血性腦損傷中的作用，本課題在新巍大鼠缺氧缺血性腦損傷模燃上，采用形態(tài)學(xué)觀察和藥理學(xué)分析等手段，研究了缺氧缺焱對(duì)EAATlmRNA及其簧自在新生大鼠腦內(nèi)表速的影

4、響，缺氧缺血后EAATl表達(dá)與神經(jīng)元DNA損傷之聞的關(guān)系，以及缺氧缺血后EAATI表達(dá)改變的功能意義。／f1．i新生大鼠缺氧缺血性腦損傷的特點(diǎn)本研究采用的新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型引起一種不完全性可逆的輕度前腦缺血。神經(jīng)無損傷僅出現(xiàn)予頸總動(dòng)脈結(jié)抽同側(cè)半球，硒對(duì)側(cè)半球未受累及。損傷主要分布在結(jié)扎側(cè)大腦中動(dòng)脈的供血區(qū)，按損傷程度和損傷逸出現(xiàn)的凡率降次辯夢(mèng)}l為：欠腦皮層>紋狀體>海馬>丘腦。損傷主要表現(xiàn)為神經(jīng)元定性、凋亡或壞死，神經(jīng)冗丟失伴膠質(zhì)細(xì)胞增童，嚴(yán)霞者可見囊狀或空腔梗塞甄．缺氯缺血厝損傷區(qū)神經(jīng)元呈T

5、UNEL染色陽性。該模型的三種對(duì)照組(單純?nèi)笔?、單純?nèi)毖鹾途Y手術(shù)經(jīng))均未霓猙經(jīng)無簇傷，鏡下示鼴鐲蕊組織結(jié)構(gòu)對(duì)稱、細(xì)胞排列規(guī)則并具正常形態(tài)特征。透過騷簇傷評(píng)分，我鈉蹺察萋《缺氧缺血后罅經(jīng)無損傷程度有一時(shí)間依賴性愛化過程：缺氟缺血后24小時(shí)出現(xiàn)明顯的神經(jīng)冗丟失，缺氧缺血君48，j、對(duì)掉經(jīng)元攘傷避一步加重，薅殃氧抉血后72小時(shí)則表現(xiàn)為損傷減輕。缺氧缺血后24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)的腦損揍分?jǐn)?shù)分剎為：17．4±2。9(玨一21)、24。3土4．1(雅=15)表5。3±3．2(n=9)。與缺氧缺成后72小時(shí)相比，

6、缺氧缺婦后24小時(shí)和48小時(shí)具較淺輯黯援飭分?jǐn)?shù)(P<0。05)，其中缺氧姣血后48，{、對(duì)該分?jǐn)?shù)值最高。該結(jié)果提示：新擻大鼠缺氧缺血后可能激活了體內(nèi)的一糖代償機(jī)制，從而使葵耪經(jīng)元損飭得以減輕。1。2缺氧缺血改變了新生火鼠腦內(nèi)EAATl的袁述原位雜交組織化學(xué)染色顯示：在假手術(shù)級(jí)(n=6)，僅靖少量EAATImRNA表這在大腦皮層第V層(1347．6士36．7OD／1_73619平方微米)。缺氧缺血后EAATlmRNA在頸總動(dòng)脈結(jié)扎同側(cè)大腦皮層上的表逸明顯較其它腦區(qū)多、且吳時(shí)閽依賴性。缺氧缺血后12小時(shí)、24

7、小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)的結(jié)扎側(cè)大腦皮屢EAATlmR姒表達(dá)量(OD／173619平方微米)分剮為：1682．2±55．0(nm5)、3071．0±198．1(n。4)、2409．8±38．6(nm5)和1437．1±75．4(nz《)。統(tǒng)計(jì)分輯表翳：缺氧鐮血后12小時(shí)、24，j、時(shí)和48小時(shí)的表這量較假手術(shù)組多(P<0．05)，其中缺氧缺血屜24小時(shí)達(dá)高峰，而缺氧缺血后72小霉孛馥表達(dá)辯恢復(fù)到鍛手術(shù)紐水平(P>0．05)。免疫組織化學(xué)染色顯示：在假手術(shù)組(nm6)，僅在大腦皮層有少蚤EAATl蛋白表這(

8、綴3±i。7個(gè)鼯經(jīng)細(xì)胞／鍛手術(shù)讕半球)。與EAATlmRNA的表達(dá)相似，缺氧缺血后EAATl蛋白在結(jié)扎側(cè)大腦皮層土壤表這也終曼較其它艨墨多、盈翼對(duì)簿農(nóng)籟檉。缺氧缺焱后i2小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)和72小時(shí)的結(jié)扎側(cè)大腦皮層EAATl免渡陽牲細(xì)A包數(shù)分署《為：30．7±l。5翻=3)、221．1±39．5《盎*7)、297．6±29．3(n=7)和44．7±4．9(n；6)。統(tǒng)計(jì)分析表明：缺氧歃焱后24，l、時(shí)爭(zhēng)48小對(duì)的EAAT