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《3株鴨源呼腸孤病毒對鴨胚成纖維細胞致病性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文3株鴨源呼腸孤病毒對鴨胚成纖維細胞致病性研究姓名：余愛花申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：基礎(chǔ)獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：胡薛英2012063株鴨源呼腸孤病毒對鴨胚成纖維細胞致病性研究摘要本研究分別將本實驗室先后分離鑒定并保存的3株(HP09318株、HP080421株、HP081122株)鴨源禽呼腸孤病毒(DuckReovirus，DRV)人工感染鴨胚和鴨胚成纖維細胞(Duckembryofibroblast，DEF)，運用細胞培養(yǎng)技術(shù)、光鏡、電鏡、RT-PCR、ELISA等多種研究方法，分別對感染鴨胚成纖維細胞后，病毒的增殖情況、細胞的病理變化、TNF．伍表達水平進行系統(tǒng)
2、的研究。人工感染鴨胚結(jié)果顯示：3株DRV經(jīng)絨毛尿囊膜途徑接種于9--一lld鴨胚，胚體在3--一6d內(nèi)全部死亡，胚體發(fā)育不良，個體偏小，全身皮膚出血，肝臟表面可見黃白色壞死點。3株DRV接種于DEF的病理變化：24h開始出現(xiàn)細胞病變，表現(xiàn)為細胞變圓，細胞內(nèi)出現(xiàn)空泡，部分細胞發(fā)生溶解，48h病變加重，大量死亡細胞懸浮于培養(yǎng)基中，其中可以見到懸浮的巨細胞。細胞經(jīng)H．E染色后，鏡下可見細胞呈拉網(wǎng)狀，部分細胞壞死，核碎裂，并且可見含有多個細胞核的巨細胞。在細胞質(zhì)中觀察到嗜酸性的包涵體顆粒。將細胞制作超薄切片，在透射電鏡下觀察，感染細胞出現(xiàn)大小不一的囊泡，可見板層樣結(jié)構(gòu)，細胞質(zhì)中可觀察到
3、病毒顆粒。3株DRV在DEF中的增殖規(guī)律：在接種病毒后12h、24h、48h、72h和96h分別收集細胞、細胞培養(yǎng)夜以及兩者的混合物，應(yīng)用熒光定量RT．PCR方法檢測病毒含量，結(jié)果顯示，接毒后12h三者中病毒含量均較低；24h三者病毒含量都呈上升趨勢，而且細胞與混合物中病毒含量最高；48h細胞與混合物中病毒含量相比24h下降，而細胞培養(yǎng)液中病毒含量達到最高；48h，--96h三者病毒含量呈降低趨勢。3株DRV病毒感染DEF后TNF．d含量變化：應(yīng)用ELISA方法檢測其蛋白水平，結(jié)果顯示接種后12h對照組中TNF．0【的含量高于接毒組，24h以后對照組與接毒組中TNF一0【含量均
4、呈增加趨勢，且接毒組高于對照組，96h檢測接毒組中TNF．a(chǎn)含量下降低于對照組；熒光定量RT-PCR方法檢測其mRNA表達水平，結(jié)果顯示DEF在接種DRV后24h'～48hTNF．a(chǎn)mRNA表達水平明顯上調(diào)，96h后TNF．a(chǎn)基因表達水平下調(diào)。結(jié)果表明：本實驗室分離保存的3株鴨源呼腸孤病毒可以在DEF中成功復(fù)制增殖，并致使細胞產(chǎn)生明顯的病理變化，被感染細胞透射電鏡下可觀察到形態(tài)一致病毒顆粒。3株DRV感染細胞導(dǎo)致接毒組與對照組細胞中TNF．Gc表達水平存在明華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩士研究生學(xué)位論文顯差異，3株DRV感染DEF后，病毒的增殖、病毒所致細胞的病理變化與細胞中TNF．
5、a表達水平三者之間呈正相關(guān)。關(guān)鍵詞：鴨源禽呼腸孤病毒；細胞培養(yǎng)；病毒增殖；TNF-alI3株鴨源呼腸孤病毒對鴨胚成纖維細胞致病性研究Abs仃actInthisstudy，duckembryoandDuckEmbryofibroblast(DEF)wereinfectedwiththreevirusstrains(HP09318strain、HP080421strain、HP081122strain)isolatedinOUrlaboratory．Theproliferationofthevirus，pathologicalchangesandTNF—acontentchange
6、swerestudiedusingcellculturetechnology，lightmicroscopy，electronmicroscopy，real—timeRT—PCRandELISA．Theresultsareasfollows：Theresultofartificialinfectionofduckembryo：9～11dayoldduckembryoweregivenallantocherioninjectionofthreeDRVstrains．Theresultshowedthatembryoproperdiedinthreetosixdayswithsym
7、ptomsofdysplasia，hemorrhage，andyellowish-whitenecroticspotsonthesurfaceofliver．PathologicalchangesofDEFinfectedwiththreestrains：TheinfectionofmonolayersofDEFwithDRVcausesacytopathiceffect(CPE)at24hourpostinfection(hpi)．theinfectedcellsmanifestround
