用hplc法測定腎移植病人的全血環(huán)孢素濃度

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1、用HPLC法測定腎移植病人的全血環(huán)孢素濃度卓海通（南京軍區(qū)南京總醫(yī)院）環(huán)孢素（CyclosporineA,CsA)是一種動相：(1)CH3CN:CH3OH:H2O(50:0:50);重要的免疫抑制劑藥物。它用于器官移植，（2）35:15:50;（3）25:25：50;（4）15:35:可延長移植后器官的成活率、預(yù)防移植器50;(5)0:50:50流速1.05ml/min。柱溫比官的排斥反應(yīng)，但CsA的血藥濃度與療效和較了41、46、51、55四種。毒副反應(yīng)密切相關(guān)。監(jiān)測血藥濃度對提高安（二）標準溶液及標準曲線精密稱取全有

2、效的用藥至關(guān)重要。10mgCsA用甲醇配制成100g/ml濃度的貯目前CsA的測定方法有RIA⒂螢光偏振備液，分裝于安瓿中置-40℃?zhèn)溆?。免?TDX)、放免單克隆抗體等法[13]。但工作標準溶液：取上述貯備液用流動相這些方法易受代謝物影響，產(chǎn)生交叉反應(yīng)[]，配制成50?100?200?400?800?1600ng/ml濃且分析精度也不如HPLC法好[4]。用HPLC度標準溶液，按峰高或峰面積與濃度求算直法測定CsA血藥濃度國外已有報道[57]。但線回歸方程。幾乎都用C8或C18柱分析，以乙腈婊或甲醇與（三）血樣采集和樣

3、品處理分別在口水二元溶劑為流動相，使用柱溫(7079℃)。服CsA后取其谷和峰時的血樣作為常規(guī)監(jiān)國內(nèi)對CsA的分析方法報道甚少，并選用測。做藥代動力學取樣為給藥后2?3479、C18或C8柱[8,9]。本文選用極性較大的CN12h血，測定其各時間點藥物濃度，按PKBP柱，使柱溫降到45?55℃媯，這樣可提高柱壽-N1程序包中程序擬合和計算藥代動力學模命30％，用乙腈、甲醇、水三元溶劑可提高型及參數(shù)。柱效、增加靈敏度2倍。本法已用于腎移植血樣處理（1）取肝素抗凝全血2ml，加病人的血藥濃度監(jiān)測和藥代動力學研究。2ml0.

4、025mol/LNaOH?旋轉(zhuǎn)混勻30s使其溶血；（2）加入5ml無水乙醚提取兩次，乙醚實驗部分提取液在45℃空氣下吹干；?3）殘渣中加入（一）儀器和試劑貝克曼114M泵，0.025mol/LHC1和甲醇各2ml?溶解后加入427積分儀和210A進樣閥，ZW-001型可變正己烷5ml洗滌兩次；（4）在上述水相中加波長紫外檢測器（南分廠）、波長210nm，入2ml0.025mol/LNaOH和4ml乙醚提取兩恒溫水浴器（精度±?0.1℃，西德Haake次，醚提取液在45℃空氣下吹干。殘渣用產(chǎn)）。100l流動相溶解后進樣20

5、l，按外標法峰甲醇、乙醚、己烷、鹽酸、氫氧化鈉均高定量。為AR.級試劑，乙腈為HPLC純，環(huán)孢素實驗結(jié)果(SandozBasleSwitzerland)。色譜條件：1．柱UltrasphereOctyl（一）CsA在不同柱上的色譜特性。比5μ蘭m4.6?250mm，柱溫60，流動相：CH3較了C8和CN柱上對CsA的保留時間（tR?、CN:CH3OH:H2O(56:22:22)；2.柱Ultras-峰高(H)、半峰寬(W1/2和理論塔片數(shù)(N)phereCN5m4.6?250mm，柱溫50媯，流的影響。結(jié)果如表1。表1C

6、sA在C8和CN柱上的色譜特性數(shù)，但隨甲醇量增加tR延長，H?N顯著降低。（三）在CN柱上不同柱溫對CsA的色譜特性的影響。在（2）號流動相條件下，分別在41465155℃柱溫時對CsA的tR、H、W/2和N和的影響，結(jié)果如表3。表3不同柱溫對CsA色譜行為的影響表1結(jié)果說明，CN柱優(yōu)于C8柱，N提高近3倍，H增高近2倍。降低柱溫可延長使用壽命，而在C8柱上當柱溫<50℃時CsA的tR>30min。圖1A為服藥前空白血色譜圖，B為服CsA后3h的血藥濃度色譜圖。（四）回收試驗和精度試驗1．分別對164205410ng/m

7、l三個濃度CsA血樣進行回收試驗，其平均回收率98.43±3.71％。結(jié)果見表4。表4CsA回收試驗結(jié)果2.精度試驗：分別對102、205、410ng/ml三個濃度在日內(nèi)(n=5)和日間(n=7)進行測定，求算其CV分別為2.02％和2.83%。（五）干擾試驗：對腎移植病人常用的（二）在CN柱上不同流動相組分對巰唑嘌呤和強的松在同樣條件下不干擾CsACsA色譜行為的影響，結(jié)果列于表2中。檢測。它們的tR為2.90和3.84min。表2結(jié)果說明（2）號流動相最理想。流（六）病人血樣監(jiān)測：對8例腎移植病動相中加入少量甲醇可改

8、善分離度，增加N人共監(jiān)測血藥濃度303次，峰濃度652.8±表2不同流動相組分對CsA色譜特性的影響158.3ng/ml，谷濃度121.9±43.1ng/ml。并進行藥代動力學研究。圖2為病人的藥-時曲線圖。討論（一）采用CN柱和三元溶劑系統(tǒng)測定CsA是值得推廣的。流動相中加入醋酸鹽或Proceedingsvolxx