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《抗人β2微球蛋白單克隆抗體的制備及elisa檢測方法的初步建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouuniVers時(shí)forthedegreeofMasterPreparationofMonoclonalAntibodiesagainstp2一microglobulinandInitiallyEstablishedELISADetectionMethodByLieMaoSupervisor：ProfY．unlongⅥ，aJlgBiochemis仃yaJldMolecul舶iologyCollegeoflifesciencesMay，2014學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重
2、聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：日期：y／p年6月70日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識(shí)產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)
3、據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：日期：、局I￥年6月f總?cè)照猵2微球蛋白(p2．microglobulin，B2一MG)是由機(jī)體產(chǎn)生的一種內(nèi)源性低分子量血清蛋白質(zhì)，分子量1l。8l①，是細(xì)胞膜上完整主要組織相容性復(fù)合物(major11istocoInpatibili西complex，MHC)I類分子的輕鏈(p鏈)，在免疫應(yīng)答中起重要作用。隨著代謝和MHc的降解，B
4、2微球蛋白分離后以游離形式存在于血清、尿液、腦脊液、唾液等體液中，含量較低且恒定。近年來，B2微球蛋白在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)及臨床診斷上的應(yīng)用己成為研究熱點(diǎn)，檢測血清或尿液中p2微球蛋白含量的變化成為評(píng)價(jià)相關(guān)臟器功能和某些疾病發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后的重要指標(biāo)。膽微球蛋白的檢測方法主要有免疫比濁法、免疫透射比濁法、化學(xué)發(fā)光法等，其中酶聯(lián)免疫法因簡便、快速、敏感性高而備受臨床歡迎，而目前可應(yīng)用于臨床的ELIsA試劑盒較少，因此研制一種快捷有效的ELIsA檢測方法具有重要意義。本研究以高純度的人B2微球蛋白作為免疫原，采用常規(guī)免疫和脾內(nèi)免疫相結(jié)合的方法免疫純系BALB／
5、c小鼠，取免疫脾細(xì)胞與對(duì)數(shù)期SP2／O細(xì)胞進(jìn)行融合，間接ELIsA法篩選陽性孔。經(jīng)3~4次克隆化、多次傳代及凍存后復(fù)蘇，共篩選獲得5株穩(wěn)定分泌抗人p2微球蛋白的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為2G7、2H2、3F9、5D10、8E12。經(jīng)鑒定，5株單抗亞型皆為IgGl類，腹水效價(jià)均在10刁一1o-9之間，腹水經(jīng)Protein_A親和層析法純化后進(jìn)行電泳，結(jié)果顯示5株單抗純度良好。間接ELIsA法和westemblot鑒定單抗特異性，結(jié)果表明5株單抗均能與人B2微球蛋白發(fā)生特異結(jié)合，而與人血清白蛋白、血紅蛋白、EB病毒基因工程抗原、支原體基因工程
6、抗原無交叉反應(yīng)，證明5株單抗具有良好的特異性和反應(yīng)原性。采用改良過碘酸鈉法分別對(duì)5株單抗進(jìn)行酶標(biāo)，經(jīng)抗體配對(duì)實(shí)驗(yàn)篩選出一對(duì)可用于雙抗體夾心ELISA的配對(duì)抗體，初步建立了B2微球蛋白雙抗體夾心定量ELIsA檢測方法。經(jīng)方陣滴定實(shí)驗(yàn)確定了包被抗體最佳包被濃度為3ug／InL，酶標(biāo)二抗最佳工作濃度為1：4000，該檢測方法線性范圍為1．25～40ngAnL，最低檢出限為1．25n咖L，批內(nèi)CV<8％，批間CV<12％，準(zhǔn)確度良好。用本研究建立的檢測方法檢測35份臨床血清標(biāo)本B2微球蛋白含量，與Roche公司的p2微球蛋白檢測試劑盒檢測結(jié)果相比，相關(guān)系
7、數(shù)R2=O．9550，兩者具有良好的相關(guān)摘要性。本研究成功制備了抗人p2微球蛋白單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，初步建立了人B2微球蛋白雙抗體夾心定量ELISA檢測方法，為進(jìn)一步研制快速診斷試劑盒和其他檢測方法奠定了良好的基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：B2微球蛋白；單克隆抗體；雙抗體夾心ELIsAAbstractB2一microglobulin(D2-micr0910buliIl，p2-MG)isa11endogenousproteinwitlllowmolecular、veightof11．8KDintheserum．It’s血elightchain(p·chain)
8、ofc1嬲sIinmembraneintegri鑼ofm萄orhistocompatibilit)，complex(MHC)，andpl
