紫莖澤蘭主要毒素euptox a的提取及其生物活性初步研究

《紫莖澤蘭主要毒素euptox a的提取及其生物活性初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、萬方數(shù)據(jù)論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研究生簽加僻多月多日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和

2、借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意17771711農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容?？诒菊撐牟槐Ｃ??？诒菊撐谋Ｃ埽谝荒杲饷芎筮m用本授權(quán)。(請(qǐng)?jiān)谝陨峡趦?nèi)劃“4”)研究生簽導(dǎo)師簽矽，噼占月歲日印c甲年6月“萬方數(shù)據(jù)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2014屆碩士學(xué)位論文摘要紫莖澤蘭(EupatoriumaderwphorumSpreng或AgeratinaadenophoraSpreng)大約于40年代從中緬邊境傳入云南省，現(xiàn)已在云南、四川、貴州、廣西和西藏有廣泛的分布，已成為危

3、害我國最為嚴(yán)重的外來入侵物種之一。對(duì)本地植物帶來災(zāi)難性的危害，給畜牧業(yè)帶來不可估量的損失，同時(shí)破壞了生態(tài)平衡，目前尚無有效的防除方法。本試驗(yàn)旨在從紫莖澤蘭中提取主要毒素9．羰基．10，11．去氫澤蘭酮(euptoxA)，構(gòu)建一種高效快速的提取方法；研究euptoxA的殺螨活性、抗腫瘤活性，以期能篩選出紫莖澤蘭主要毒素的有益生物活性，為探索紫莖澤蘭新生源奠定理論基礎(chǔ)，同時(shí)也為尋找防治、利用紫莖澤蘭的新方法提供依據(jù)。其研究內(nèi)容如下：1．紫莖澤蘭主要毒素euptoxA的提取、分離及純化流程：甲醇超聲提取，乙酸乙酯萃取，硅膠柱層

4、析，薄層色譜法(TLC)初步篩選，上D101大孔樹脂柱洗脫，粗品反復(fù)硅膠柱層析。高效液相色譜檢測，結(jié)果表明euptoxA提取樣品其純度可達(dá)到98％以上。2．采用互補(bǔ)雙對(duì)數(shù)(CLL)模型分析euptoxA對(duì)兔癢螨和兔疥螨的體外毒性。結(jié)果顯示：euptoxA對(duì)兔癢螨和兔疥螨都有很強(qiáng)的殺滅效果。EuptoxA在濃度3mg／mL和4mg／mL時(shí)在4h內(nèi)能夠殺死所有的疥螨，而在4mg／mL時(shí)也可在4h內(nèi)殺死所有的兔癢螨。在euptoxA濃度為2mg／mL、3mg／mL和4mg／mL時(shí)對(duì)兔疥螨的半數(shù)致死時(shí)間(LTso)分別為0．68

5、7h、O．526h、O．326h。EuptoxA濃度為3mg／mL和4mg／mL時(shí)對(duì)兔癢螨的LTs0分別為0．693h和0．493hoEuptoxA在2h內(nèi)兔疥螨和兔癢螨的半數(shù)致死濃度(LCs0)分別為1．068mg／mL、0．902mg／mL。結(jié)果表明，euptoxA具有較強(qiáng)的殺螨活性，有潛力作為動(dòng)物殺螨的新藥物。3．采用MTT比色法測定euptoxA體外抗腫瘤活性，以人肺腺癌細(xì)胞系A(chǔ)549、人宮頸癌細(xì)胞系HeLa和人喉表皮癌細(xì)胞系Hep．2為靶細(xì)胞，并采用膜聯(lián)蛋白V-FITC／PI雙染色法用流式細(xì)胞儀和熒光定量PCR

6、測定HeLa細(xì)胞凋亡周期及相關(guān)凋亡基因的表達(dá)。結(jié)果顯示：euptoxA對(duì)體外培養(yǎng)的三株腫瘤維胞都有不同程度的抑制作用。不同euptoxA濃度(O．25mg／mL、O．5mg／mL、1mg／萬方數(shù)據(jù)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2014屆碩j仁學(xué)位論文mL和2mg／mL)對(duì)三三株腫瘤細(xì)胞的抑制作用差異恩著(P<0．05或P<0．01)。隨著濃度的增加抑制率增加，對(duì)A549、HeLa和Hep一2三株腫瘤細(xì)胞系的半數(shù)抑制濃度(ICs0)分別為369}tg／mL、401gg／mL和427gg／mL。流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示：euptoxA處理組處于

7、S期的細(xì)胞數(shù)量與陰性對(duì)照組比較差異性顯著(P<0．05或P<0．01)，并呈一定的量效關(guān)系，說明euptoxA阻滯細(xì)胞于S期，使HeLa細(xì)胞發(fā)生S阻滯的生物學(xué)效應(yīng)，從而起到抗腫瘤作用。熒光定量PCR結(jié)果顯示：euptoxA能促進(jìn)HeLa細(xì)胞中caspase一10mRNA表達(dá)上調(diào)，但不呈現(xiàn)劑量依賴性，隨著euptoxA劑量增加，caspase。10mRNA表達(dá)量表現(xiàn)為先增加、后減少，在質(zhì)量濃度30p．g／mL時(shí)，caspase．10mRNA表達(dá)量最大，為對(duì)照組mRNA表達(dá)量的4．12倍，但不同濃度的euptoxA對(duì)casp

8、ase一3mRNA表達(dá)量與對(duì)照組相比無顯著差異(P>0．05)。關(guān)鍵詞：紫莖澤蘭；9．羰基．10，11．去氫澤蘭酮；提?。粴Ⅱ钚?；抗腫瘤活性II萬方數(shù)據(jù)四川農(nóng)業(yè)大學(xué)2014屆碩士學(xué)位論文StudyonExtraction，IsolationandBiologicalActivityofeuptoxAfromEupa