lox-1在低氧誘導肺動脈高壓肺血管重構中的作用及機制

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1、中圖分類號UDCR96610博士學位論文學校代碼!Q§三三密級公玨LOX．1在低氧誘導肺動脈高壓肺血管重構中的作用及機制RoleofLOX一1inpulmonaryvascularremodelingof_●■'1l·●l■●hypoxiainducedpulmonaryarterialnVDertenSlonandtheunderlyingmechanisms作者姓名：學科專業(yè)：研究方向：學院(系、所)：指導教師：副指導教師：張衛(wèi)芳藥理學心血管藥理學藥學院胡長平論文答辯日期211三：』：>9答辯委員會主席中南大學二O一三年四月、原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行

2、的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：遠里莖日期：壘壘年』月立日學位論文版權使用授權書本人了解中南大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學校可以公布學位論文的全部或部分內容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權中國科學技術信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)

3、庫》，并通過網絡向社會公眾提供信息服務。作者簽名：整蘭莖導師簽名——日期：絲堡年上月三Et第一章LOX．1介導低氧誘導肺動脈高壓肺血管重構摘要【研究背景】肺動脈高壓(pulmonaryarterialhypertension，PAl-I)表現(xiàn)為靜息時平均肺動脈壓大于25mmHg或運動時大于30mmHg，肺血管阻力大于3Wood單位。PAH的主要病因是肺小動脈原發(fā)病變而導致肺動脈阻力增加，最終可導致患者右心衰竭而死亡。業(yè)已證明，PAH時肺動脈阻力增高的主要原因是肺血管重構導致肺動脈腔隙狹窄，而肺動脈平滑肌細胞(pulmonaryarterialsmoothmusclecells，PASMC

4、s)的過度增殖是引起血管重構的關鍵因素。凝集素樣氧化性低密度脂蛋白受體．1(1ectin．1ikeoxidizedlowdensitylipoproteinrecepter-1，LOX．1)在多種心血管疾病(包括動脈粥樣硬化和高血壓心血管重構)的發(fā)生與發(fā)展中起重要作用。LOX．1通過氧化應激和促炎機制損傷血管內皮細胞，促進心肌細胞和血管平滑肌細胞增殖從而介導心臟、胸主動脈和腎血管重構。最新研究發(fā)現(xiàn)，LOX．1在培養(yǎng)的慢性栓塞性肺動脈高壓患者PASMCs中表達增加，可能介導C反應蛋白所誘導的PASMCs增殖。但LOX．1在低氧PAH血管重構中的作用及機制目前仍不清楚。因此，本研究擬在低氧誘

5、導的PAH大鼠模型及原代PASMCs模型，探討LOX．1是否介導低氧誘導PAH肺血管重構，并進一步探討該作用是否與其促PASMCs增殖有關。TT【方法】(1)在體實驗：180-220gSD大鼠，采用低氧倉(10％02)飼養(yǎng)3周誘導低氧PAH大鼠模型。右頸外靜脈插管測定右心室收縮壓(IWSP)、平均肺動脈壓(mPAP)。分離右心室(RV)、左心室加室間隔(LV+IS)并稱重，計算RV／(LV+IS)比值。ELISA法檢測大鼠血漿中sLOX．1水平；提取肺動脈總RNA或蛋白，real．timePCR或WesternBlot檢測LOX．1、Ki．67、PCNAmRNA或蛋白表達；4％多聚甲醛固

6、定肺組織，石蠟包埋，進行HE染色或LOX．1免疫組化染色。(2)細胞實驗：大鼠原代PASMCs采用組織塊貼壁法制備，取第3代細胞進行oc．actin免疫組化鑒定細胞。3-6代用于后續(xù)實驗。低氧(3％02)刺激細胞增殖。(3)LOX．1中和抗體實驗：采用不同濃度LOX．1中和抗體(5、10、20ng／m1)預孵育1h，real．timePCR或WesternBlot檢測LOX．1、Ki．67、PCNAmRNA或蛋白表達，流式細胞術檢測細胞周期，MTS檢測細胞增殖情況。(4)LOX．1小分子RNA干擾(si對悄)實驗：當PASMCs達到60％---70％融合后，采用TurboFect轉染試劑

7、將LOX-1siRNA干擾片段瞬時轉入細胞，干擾LOX．1表達，real．timePCR或WestemBlot檢測LOX．1mRNA或蛋白表達變化評價不同片段的干擾效率，選擇最佳干擾片段及適當?shù)臐舛扔糜诤罄m(xù)實驗。LOX．1siRNA干擾24h后低氧處理細胞。Real．TimePCR或WesternBlot檢測飚．67，PCNAmRNA或蛋白表達，流式細胞術檢測細胞周期，MTS檢測細胞增殖情況。【結果】1．低氧誘導PAH大鼠的RVSP