抑制prrsv增殖的mirna的篩選

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1、分類號(hào)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文抑制PRRSV增殖的miRNA的篩選ScreeningofMicrornaInhibitingPRRSVReplication研究生:學(xué)號(hào):指導(dǎo)教師:指導(dǎo)小組:專業(yè):預(yù)防獸醫(yī)學(xué)獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士鐘瑤2010302110201肖少波教授方六榮教授羅銳副教授密級(jí)研究方向:動(dòng)物病毒學(xué)獲得學(xué)位時(shí)間:2013年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué).動(dòng)物醫(yī)學(xué)院二O一三年六月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明及使用授權(quán)書學(xué)位論文磊如需保密,解密時(shí)間年月日是否保密?聲明1愀嬲本人聲明所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及

2、取得的研究成果。盡我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包含為獲得華中農(nóng)業(yè)大學(xué)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料,指導(dǎo)教師對(duì)此進(jìn)行了審定。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中做了明確的說明,并表示了謝意。研究生簽名:勵(lì)騮時(shí)間:≯p,弓年z月芬日學(xué)位論文使用授權(quán)書本人完全了解華中農(nóng)業(yè)大學(xué)關(guān)于保存、使用學(xué)位論文的規(guī)定,即學(xué)生必須按照學(xué)校要求提交學(xué)位論文的印制本和電子版本;學(xué)校有權(quán)保存提交論文的印刷版和電子版,并提供目錄檢索和閱覽服務(wù),可以采用影印、縮印或掃描等

3、復(fù)鍘手段保存、匯編學(xué)位論文。本人同意華中農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容,為存在館際合作關(guān)系的兄弟高校用戶提供文獻(xiàn)傳遞和交換服務(wù),同時(shí)本人保留在其他媒體發(fā)表論文的權(quán)力。注:保密學(xué)位論文(即涉及技術(shù)秘密、商業(yè)秘密或申請(qǐng)專利等潛在需要提交保密的論文)在解密后適用于本授權(quán)書。學(xué)位論文作者張砰驏鋤撓前’;止簽名日期:扣,多年占月,曰日簽名日期:o、-ol?年石月fp日抑制PRRSV增殖的miRNA的篩選目錄摘要????????????????????????????????iABSTRACT???????

4、??????????????????????????????..iii縮略語表(ABBREVIATIoN)????????????????????.v第1章文獻(xiàn)綜述??????????????????????????.11.1PRRSV??????????????????????????????????.11.1.1PRRSV理化特性???????????????????11.1.2PRRSV分子生物學(xué)??????????????????21.1.3PRRS的防治????????????????????..21.2miRNA????

5、????.??????????????????????????31.2.1miRNA的產(chǎn)生及作用方式???????????????31.2.2miRNA參與多種生命過程??????????j?????51。2.3IIliRNA表達(dá)的調(diào)控??????????????????61.2.4miRNA應(yīng)用前景???????????????????61.2.5miRNA研究方法???????????????????7第2章目的與意義?????????????????????????.8第3章材料與方法?????????????????????

6、????.93.1實(shí)驗(yàn)材料?????????????????????????93.I.1毒株與菌株?????????????????????.93.1.2細(xì)胞系以及轉(zhuǎn)染相關(guān)材料???????????????93.1.3載體及構(gòu)建所用材料???。?????????????.93.I.4Western-blot試驗(yàn)所用材料??????????????.1O3.1.5培養(yǎng)基及其配制?-?????????????????.113.1.6Western.blot相關(guān)試劑配制??????????????..113.1.7分子生物學(xué)分析軟件???

7、??????????????123.2實(shí)驗(yàn)方法????????????????????????.133.2.1靶基因3'UTR報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建????????????.133.2.2靶點(diǎn)突變報(bào)告質(zhì)粒的構(gòu)建???????????????183.2.3雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)????????????????..183.2.4WesternBlot檢測(cè)PRRSV蛋白水平變化????????..183.2.5VSV-GFP的增殖實(shí)驗(yàn)????????????????.19華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2013屆碩士學(xué)位論文3.2.6空斑試驗(yàn)檢測(cè)PRRSV的增殖差異??

8、?????????193.2.7熒光定量qRT-PCR檢測(cè)miRNA表達(dá)差異???????.193.2.8統(tǒng)計(jì)學(xué)方法????????????????????。21第4章結(jié)果與分析?????????????????????????224

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