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《雌激素延緩皮膚老化作用機制的初步探討》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、南方醫(yī)科大學(xué)2010級碩士學(xué)位論文雌激素延緩皮膚老化作用機制的初步探討Apreliminarystudyofthemechanismofestrogendelaying●slunaging課題來源：廣東省科技計劃項目，編號20108031600263(雌激素延緩皮膚衰老的分子機制研究)學(xué)位申請人左俊導(dǎo)師姓名李勤教授專業(yè)名稱外科學(xué)培養(yǎng)類型學(xué)術(shù)型培養(yǎng)層次碩士研究生所在學(xué)院第一臨床學(xué)院2013年3月22日廣州l㈣刪碩士學(xué)位論文’一雌激素延緩皮膚老化作用機制的初步探討碩士研究生：左俊指導(dǎo)老師：李勤教授摘要第一部分雌二醇對皮膚成纖維細(xì)胞增殖遷移影響及其調(diào)控機制的實驗研
2、究目的：觀察雌激素(1713．estrogen，1713-E2)對體外培養(yǎng)的正常人皮膚成纖維細(xì)胞(Humanskinfibroblast，HSFB)增殖與遷移的影響，探究雌激素調(diào)控人皮膚成纖維細(xì)胞增殖是否受到絲裂原活化蛋白激酶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路(mitogen—activatedproteinkinases，MAPKs)的影響，弄清其可能的調(diào)控途徑及機制。方法：采用酶消化法體外分離培養(yǎng)正常人皮膚成纖維細(xì)胞，取第3-6代細(xì)胞用于實驗；1．采用MTT法，分別于不同濃度1713．E2、1713．E2+雌激素p受體拮抗劑ICI．182780和空白干預(yù)后24、48、72、9
3、6h，檢測成纖維細(xì)胞的分裂增殖活力：2．建立體外細(xì)胞劃痕(Scratch．Wound)模型，分別于模型制備后24、48h、72h利用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞在不同濃度1713．E2、1713．E2+ICI．182780和空白干預(yù)下的遷移情況；3．利用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測成纖維細(xì)胞爬片在17B．E2、17B．E2+ICI．182780和空白干預(yù)后TGFl31蛋白表達(dá)的變化：4．流式細(xì)胞術(shù)檢測1713．E2及雌激素p受體拮抗劑ICI．182780對成纖維細(xì)胞周期分布的影響：5．按干預(yù)因素的不同將細(xì)胞分為6組：空白對照組(A組)、1713．E2組(B組)、1713-
4、E2+ICI-182780組(C組)、1713-E2+PD98059組(D組)、1713-E2+SP600125組(E組)和1713．E2+SB203580組(F組)，收集經(jīng)上述各激酶抑制劑和(或)雌激素處理后的成纖維細(xì)胞，提取總RNA和總蛋白，分別利用摘要熒光定量PCR和Western．Blot技術(shù)檢測各組細(xì)胞增殖細(xì)胞核抗原(Proliferationcellnuclearantigen，PCNA)mRNA和蛋白的表達(dá)變化情況。結(jié)果：1．(1)MTT檢測發(fā)現(xiàn)，24h時，各個濃度(10-8_10。12mol／L)雌激素刺激組細(xì)胞增殖效應(yīng)與空白對照組無顯著差異
5、(O．118士0．005、O．113+0．007、0．128士0．013、0．113-4-0．006、0．122+0．012vs0．115土0．007)(P>0．05)：48、72、96h時，均以10。10mol／1雌激素組促增殖效應(yīng)最強(48h，0．208士0．015vs0．121士0．015、0．137土0．017、0．172士0．012、0．137士0．019)；其中72、96h時各濃度組雌激素促增殖效應(yīng)均顯著強于空白組(72h，0．245士0．028、0．303士0．022、0．378士0．041、0．276士0．036、0．232士0．022vsO
6、．166土0．025：96h，0．344士0．036、0．406土0．033、0．485士0．031、0．386土0．032、0．368土0．034vsO．196士0．033)(PO．05)；而48、72、96h時，A組促增殖效應(yīng)均明顯強于另外兩組(48h，O．211+0．015vsO．119土0．016、O．136
7、士0．015；72h，0．352士0．049vsO．168士0．030、0．232士0．025：0．486土0．028vs0．196土0．024、0．368士0．034)(P<0．01)；B組細(xì)胞在48h時增殖效應(yīng)與C組無差別(0．136士0．015vsO．119土0．016)(尸>O．05)，但72、96h時均顯著強于C組(72h，0．232土0．025vs0．168士0．030；96h，0．368士0．034vs0．196士0．024)(尸<0．01)。2．(1)比較48h時各組細(xì)胞遷移效應(yīng)，以10罐mol／1雌激素組最強(568．4士11．305vs4
8、13．2土25．616、429．4士20．281、5
