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《種子特異表達啟動子的克隆分析及其植物表達載體的構(gòu)建》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、華北農(nóng)學報#2007,22(2):6-10種子特異表達啟動子的克隆分析及其植物表達載體的構(gòu)建1,21,21,21,21,2朱亞蘭,姚偉,竇建華,樂超銀,何正權(quán),1,21,21,2陳發(fā)菊,梁宏偉,梁薇(11三峽大學生物技術(shù)研究中心,湖北宜昌443002;21湖北省天然產(chǎn)物研究與利用重點實驗室,湖北宜昌443002)摘要:根據(jù)GenBank已公布的種子特異性的Oleosin蛋白基因啟動子序列設(shè)計合成引物,利用PCR技術(shù)從油菜總基因組DNA中擴增出Oleosin基因啟動子序列(SOP),將該序列克隆到pGM-T
2、載體中,經(jīng)鑒定獲得pGM-T-SOP重組載體。測序和序列分析表明,該啟動子序列由899bp核苷酸組成,其核苷酸序列與GenBank中的Oleosin基因啟動子序列同源性高達95.6%。分別用限制性內(nèi)切酶Hindó和BamHI雙酶切重組質(zhì)粒pGMT-SOP和雙元植物表達載體pBI121,分別回收pGMT-SOP重組質(zhì)粒中的SOP小片段和pBI121植物表達載體中去掉CaMV35S組成型啟動子的大片段,經(jīng)連接、轉(zhuǎn)化和鑒定,獲得由SOP驅(qū)動報告基因GUS的新型植物表達載體pBI121-SOP,為外源基因在油菜種
3、子中的定位表達研究奠定基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞:種子特異表達啟動子;克隆;油菜中圖分類號:Q789文獻標識碼:A文章編號:1000-7091(2007)02-0006-05CloningandAnalysisofSeedsOi-lbody-specificPromoterfromtheBrassicanapusandConstructionofPlantExpressionVector1,21,21,21,21,2ZHUYa-lan,YAOWei,DOUJian-hua,YUEChao-yin,HEZheng-qua
4、n,1,21,21,2CHENFa-ju,LIANGHong-wei,LIANGWei(1.BiotechnologyResearchCenter,ThreeGorgesUniversity,Yichang443002,China;2.KeyLaboratoryofNaturalProductsResearchandDevelopment,Yichang443002,China)Abstract:Apairofprimerswasdesignedaccordingtothesequenceofoleosi
5、nproteinpromoter,whichshowedseedsoi-lbodyspecificity,andafragmentofoleosingeneinthepromoterregionwasamplifiedbypolymerasechainreaction(PCR)usingthegenomicDNAofBrassicanapusastemplate.ThefragmentwasclonedintopGM-Tvector,andanewrecombinedvectornamedpGM-T-SO
6、PwasobtainedafteranalyzedwithPCRandrestrictiondigestion.Theresultsofse-quenceanalysisindicatedthatthisfragmenthad95.6%homologycomparedwiththereportedpromoterinGenbank.AnewplantexpressionvectornamedpBI121-SOPinwhichthereportergeneGUSisdrivedbySOPwasconstru
7、ctedaftercuttingtwovectorspGMT-SOPandpBI121withtworestrictionenzymesHindóa(chǎn)ndBamHI,subsequentlyrecoveringthesmallSOPfragmentfrompGMT-SOPrecombinedvectorandthelongfragmentexcisedCaMV35SpromoterfrompBI121plantexpressionvector,andthenligation,transformationan
8、didentification.Andthenfoundationhasbeensetupforfurtherresearchworkinexpressionandfunctionofthispromoter.Keywords:Seedsoi-lbody-specificpromoter;Cloning;Brassicanapus.油菜是重要的油料作物之一,隨著分子生物學油菜遺傳轉(zhuǎn)化的啟動子多屬組成型表達啟動子如技術(shù)的發(fā)展,有
