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《辣椒COI1.2基因的克隆、表達分析和植物表達載體的構(gòu)建-論文.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、2014年27卷4期西南農(nóng)業(yè)學報V0L27N4SouthwestChinaJournalofAgriculturalSciences文章編號：1001—4829(2014)04—1649—07辣椒COH．2基因的克隆、表達分析和植物表達載體的構(gòu)建黃小云，陳再剛，楊俊年，胡廷章(重慶三峽學院生命科學與工程學院，重慶4O4OOO)摘要：利用RT—PCR技術(shù)，通過同源克隆從辣椒中分離到CaCOH．2基因，采用生物學軟件對序列進行生物信息學分析，采用實時定量RT—PCR技術(shù)分析基因的表達模式。結(jié)果表明：克隆到的CaCOH．2基因長度
2、為2041bp，推測其讀碼框大小為1812bp，編碼603個氨基酸。在CaCOI1．2蛋白質(zhì)N-端有一個F．box結(jié)構(gòu)域，C．端有6個富含亮氨酸結(jié)構(gòu)域。CaCOI1．2蛋白的氨基酸與巳知其他植物COIl蛋白序列有53．o3％-93．37％的一致性。聚類分析結(jié)果顯示：CaCOII．2與番茄、煙草和葡萄等雙子葉植物的親緣關(guān)系較近，而和水稻、玉米、高粱等單子葉植物的親緣關(guān)系較遠。CaCOH．2在辣椒的不同生長發(fā)育時期的組織中都能表達，在花和青熟期果實中表達水平較高，表明CaCOI1．2在花和果實的發(fā)育過程中起重要作用。構(gòu)建植物表達
3、載體pBI121一CaCOII．2，并導入根癌農(nóng)桿菌LBA4404中，得到植物轉(zhuǎn)化工程菌，這為下一步用于辣椒等作物的轉(zhuǎn)基因操作、研究CaCOH．2基因在植物中的功能莫定了基礎。關(guān)鍵詞：辣椒；COH．2；基因克隆；序列分析；基因表達；載體構(gòu)建中國分類號：$641．3文獻標識碼：ACloningandExpressionAnalysisofCOl1．2GeneofChiliPepperandPlantExpressionCassettesConstructionHUANGXiao-yun，CHENZai—gang，YANGJun
4、·nian，HUTing—zhang’(SchoolofLifeScienceandEngineering，ChongqingTlIeeGorgesUniversity，Chongqin8404OOO，China)Abstract：Inthispaper，theeDNAsequencesofCaCOl1．2fromChilipepperbyhomologycloningweldclonedwithRT-PCR，thebioinfor-marionofitssequenceswasanalyzedbyusingbiologys
5、oftware，andtheexpressionofCaCOl1．2W&Sdeterminedbyreal-rimequantitativeRT-PCR．TheresultsshowedthatCaCOH．2wl舳2041bpinlength．CaCOl1．2containeda1812-bpopenreadingflameandencodedaputativepolypeptideof503anlinoacids．CaCOI1．2proteinw∞predictedtopossessanF-boxattheN—termin
6、alandsixleucine-riehrepeatsdomainsattheC—termina1．Comparedwithotherspeciesinsequencinganalysis，CaCOI1．2proteinI~luencehad53．03％-93．37％idenrityinanti—noacids．TheresultsofclusteringanalysisshowedthatCaCOII．2hadcloserreh6onwithisolatesfromdicotyledonsuchastomato，tobac
7、coandgrapethanthatfrommonocotyledonsucha8rice，maigeandsr~insorghum．TheCaCOIIgenewa8transcribedindiferenttissueorgansofchilipepper，andtheexpressionlevelofCaCOHinitsflowersandmaturegivenfruitwerehigherthanthatinotheraJljd】r∞edtissueorgan8，andtheseresultsindicatedthat
8、CaCOI1hadanefectonthedevelopmentofflowerandfruit．AfterconstructingtherecombinantvectorpB1121一CaCOI1．2，pBI121-CaCOI1．2Vectorw88introducedintoA．1ws
