亞油酸對培養(yǎng)日本沼蝦肝胰腺細胞的影響

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1、第"’卷第!期河北大學學報（自然科學版）T;4#"’2;#!"$$’年!月L;FBG34;M5HCHENGEOHBIEPQ（23PFB34RAEHGAHS>EPE;G）L3G#"$$’!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!亞油酸對培養(yǎng)日本沼蝦肝胰腺細胞的影響王宏偉!，劉瑞蘭!，"，郭明申!，康現(xiàn)江!（!#河北大學生命科學學院，河北保定$%!$$"；"#西南師范大學生命科學學院，重慶&$$%!’）摘要：對日本沼蝦肝胰腺細胞進行培養(yǎng)，采用(!))（*+,-.,/0）細胞培養(yǎng)基加質(zhì)量分數(shù)為!$1

2、的胎牛血清，添加的補充成分有：23-4，235-.，(7-4，-3-4，葡萄糖，青霉素和鏈霉素#同時對85和滲透壓6""兩因子進行了研究，結(jié)果表明85%#$!%#"、滲透壓為9$$／7時，細胞長勢最好#以此作為培養(yǎng)條件，在":;4培養(yǎng)基中加入促細胞生長因子的亞油酸，發(fā)現(xiàn)其促生長作用明顯，其中亞油酸濃度為!9#關(guān)鍵詞：日本沼蝦；肝胰腺細胞；細胞培養(yǎng)；亞油酸中圖分類號：?"%&文獻標識碼：@文章編號：!$$$=!’9’（"$$’）$!=$$%)=$’日本沼蝦（(3AB;CB3ADEF:GE88;G

3、HGIH）俗名青蝦，屬甲殼綱，十足目，游泳亞目，長臂蝦科，是我國最主要的淡水經(jīng)濟蝦類#近年來，病毒病已成為制約蝦類養(yǎng)殖的關(guān)鍵因素之一，組織培養(yǎng)作為一種病理學研究的方法，其發(fā)展已成為甲殼動物病毒病研究的一個矚目熱點問題［!］#-DHG等首先報道了斑節(jié)對蝦卵巢、心臟、肌肉、神經(jīng)、腸道、肝胰腺和鰓等組織的體外培養(yǎng)［"］#胡珂等對肝胰腺、卵巢、血細胞、肌肉、上皮和心臟等組織進行了培養(yǎng)，將中國對蝦肝胰腺組織細胞傳至幾十代，存活’個多月［6］#5IF等曾報道在斑節(jié)對蝦的類淋巴器官組織的培養(yǎng)基中，加入"$:7／0的堿性纖維生長因子，使其細胞繼代培養(yǎng)超過J$代［&］#以上都是針對海水蝦，然而

4、對淡水蝦類的細胞培養(yǎng)研究較少，尤其對日本沼蝦肝胰腺的培養(yǎng)尚未見報道#肝胰腺具有解毒功能，但同時又是蝦類最易患病的部位#本實驗以日本沼蝦為材料，對其肝胰腺細胞進行了體外培養(yǎng)，以期找到適宜的條件，為蝦類細胞工程、遺傳育種和生理病理等方面的研究提供參考#!材料與方法!#!材料實驗所用日本沼蝦購于保定府河市場，實驗前暫養(yǎng)%>左右#!#"方法!#"#!準備工作培養(yǎng)基用$#""的微孔濾膜過濾除菌，所有物品均嚴格滅菌，實驗在無菌間的超凈工作臺進行，操作":環(huán)境經(jīng)紫外燈滅菌#!#"#"肝胰腺細胞的原代培養(yǎng)將日本沼蝦用%’1酒精進行消毒；取出肝胰腺，用53GKI（平衡鹽溶液）漂洗6次，雙抗（青

5、、鏈霉素）洗!次，隨后用53GKI再洗!次，將組織塊剪成約!::6小塊；取液器吹打，使細胞分散；接種于設(shè)有影響因子收稿日期："$$&=$%=!!基金項目：河北大學博士基金資助；河北大學自然科學青年項目（?"$$&$%）資助；河北省動物學重點學科資助作者簡介：王宏偉（!)%$=），女，河北張家口人，河北大學講師，博士研究生，主要從事水生生物學研究#萬方數(shù)據(jù)·34·河北大學學報（自然科學版）!44:年!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!不同濃度梯度的培養(yǎng)基中；在!"#$%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；每天用

6、倒置顯微鏡觀察細胞的生長情況，并拍照&!’&!&(肝胰腺細胞的繼代培養(yǎng)用取液器吸干原代培養(yǎng)基；用)*+,-./平衡鹽溶液（不含$,!0，12!0）洗’!!次，加入胰蛋白酶’!!滴消化3!’456-，后加入’!!滴培養(yǎng)基終止消化；用取液器吸出少許消化液，用)*+,-./漂洗，再加入少許繼代培養(yǎng)基，用彎頭滴管反復(fù)吹打制成細胞懸液，傳代至另一培養(yǎng)板，在!"#$%培養(yǎng)箱中培養(yǎng)&!!結(jié)果!&’培養(yǎng)條件的優(yōu)化!&’&’$,!0，12!0的加入!種培養(yǎng)基成分分別為培養(yǎng)基"：1’77、血清、葡萄糖、青霉素和鏈霉素&培養(yǎng)基#：1’77、血清、葡萄糖、青霉素、鏈霉素、8,$9，8,+$%(，12

7、$9!和$,$9!&倒置顯微鏡下觀察，結(jié)果表明：加入$,!0，12!0的細胞貼壁較好，覆蓋率可達7:;以上，而未加入$,!0，12!0的貼壁不牢，細胞多處半懸浮狀態(tài)，不利于細胞的生長&!&’&!<+和滲透壓的選擇本實驗對培養(yǎng)日本沼蝦肝胰腺細胞的培養(yǎng)基的<+和滲透壓做了以下!組實驗組合&表’培養(yǎng)基的<+和滲透壓組合"!"#$’%&’#()"*(&)+"&,-.")/&+’&*(0-12++312()*42’2/(3’組號<+滲透壓／（·2>’）生長狀況$5=9’?&4@4400!?&4"44000(?&4