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1、上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：M150150253上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文新西蘭黑金鮑（Haliotisiris）外套膜與腹題目：足部黑色性狀的初步研究PreliminaryResearchofBlackMantleand英文題目：MuscleoftheNewZealandHaliotisiris專(zhuān)業(yè)：漁業(yè)研究方向：海洋貝類(lèi)學(xué)姓名：郝世鑫王曉通教授指導(dǎo)教師：郭文研究員二O一八年五月十八日I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文II上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱(chēng)備注孫衛(wèi)明
2、煙臺(tái)大學(xué)教授主席劉永勝煙臺(tái)市水產(chǎn)研究所研究員委員姜海濱山東省海洋資源與環(huán)境研究院教授委員張超山東省海洋資源與環(huán)境研究院秘書(shū)答辯地點(diǎn)山東省海洋資源與環(huán)境研究院答辯日期2018-5-18二樓會(huì)議室III上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文新西蘭黑金鮑（Haliotisiris）外套膜與腹足部黑色性狀的初步研究摘要新西蘭黑金鮑（Haliotisiris），屬軟體動(dòng)物門(mén)（Mollusca）,，腹足綱（Gastropoda），前鰓亞綱（Prosobranchia），原始腹足目（Archaeogastropoda），鮑科（Haliotidae）。鑒于國(guó)內(nèi)鮑
3、類(lèi)產(chǎn)業(yè)出現(xiàn)的種種問(wèn)題，需要引進(jìn)或培育新鮑種，黑金鮑體積比較大，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，且具有獨(dú)特的外形特征，其軟體部表面覆有一層黑膜，與其余鮑類(lèi)存在顯著的差異。在前人的研究基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)繼續(xù)對(duì)黑金鮑進(jìn)行了多方面的研究:首先，從黑金鮑外套膜與腹足部提取黑色物質(zhì)，確定是否為黑色素這一物質(zhì)；然后以轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)對(duì)黑金鮑和皺紋盤(pán)鮑的腹足與外套膜組織進(jìn)行研究，對(duì)比分析兩種鮑存在性狀差異的基因?qū)用娴脑颍玫浇Y(jié)果如下：一、黑色物質(zhì)提取鑒定分別取黑金鮑覆有黑色物質(zhì)的外套膜與腹足部的表層共兩份樣品，經(jīng)切碎、鹽酸浸泡水解、沸水浴、抽濾、脫脂與干燥等步驟后，獲得
4、兩份黑色物質(zhì)樣品。對(duì)所得樣品進(jìn)行紫外光譜與紅外光譜的鑒定，結(jié)果顯示兩份樣品均具有相同的光譜特性：在紫外波長(zhǎng)下存在明顯吸收特征，并有最大吸收峰，其最大值在210-220nm處，并且隨著波長(zhǎng)的增加，其吸光值也下降，與經(jīng)典的黑色素紫外掃描圖譜一致；紅外光譜特征吸收峰主要集中在以下三組峰：3400~3200cm-1、1520~1620cm-1和1250~1100cm-1，其中3269cm-1處強(qiáng)吸收峰是由O—H和吲哚的N—H伸縮振動(dòng)產(chǎn)生的，1620cm-1處吸收峰屬于黑色素典型的苯醌類(lèi)結(jié)構(gòu),1526cm-1處的吸收峰推測(cè)有黑色素典型的吲哚結(jié)
5、構(gòu),另外2923cm-1處的吸收提示黑金鮑軟體部中黑色素含有脂肪族結(jié)構(gòu)。由以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，從黑金鮑軟體部提取的黑色物質(zhì)為真黑色素。二、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序篩選基因?yàn)榱搜芯亢诮瘐U軟體部獨(dú)特的黑色性狀與其他鮑類(lèi)基因?qū)用娴牟町悾狙芯恳?只黑金鮑和3只皺紋盤(pán)鮑為研究材料，分別取外套膜與腹足部?jī)煞N組織作為樣品，使用轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù)（IlluminaHiseqTM2500），對(duì)來(lái)自黑金鮑與皺紋盤(pán)鮑的樣品進(jìn)行基因轉(zhuǎn)錄組測(cè)序組裝。本次測(cè)序共計(jì)獲得517192821條cleanreads，199359條Unigene，平均長(zhǎng)度為1017.44kb，然后通過(guò)G
6、O、NR、KEGG和Swiss-ProtIV上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文四大數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)獲得的Unigene進(jìn)行相關(guān)基因的篩選與功能注釋?zhuān)诤诮瘐U-皺紋盤(pán)鮑外套膜組共得到690個(gè)GOTerm，10個(gè)pathway；在黑金鮑-皺紋盤(pán)鮑腹足組共計(jì)得到1409個(gè)GOTerm，29個(gè)pathway，且根據(jù)GO與KEGG通路信息的富集分析，查找與黑色素合成代謝相關(guān)的信息，最終篩選出四個(gè)目的基因，基因序列編碼為：comp134829_c0_seq2_1、comp122073_c0_seq1_2、comp107296_c0_seq1_1、comp1222
7、78_c0_seq1_1。三、熒光定量PCR對(duì)轉(zhuǎn)錄組中提取的12份RNA進(jìn)行測(cè)試，然后轉(zhuǎn)錄成cDNA，并設(shè)計(jì)引物進(jìn)行熒光定量實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，引物擴(kuò)增效率在88％?100.5％之間，擴(kuò)增效果好，可進(jìn)行熒光定量實(shí)驗(yàn)。最終從定量結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組結(jié)果比對(duì)得到在皺膜-黑膜比較組，comp134829和comp122073定量PCR的結(jié)果一致，comp134829與comp122073在所取樣品中的定量結(jié)果均和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序結(jié)果吻合；皺足-黑足比較組，只有comp122073在樣品中熒光定量結(jié)果與轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的結(jié)果吻合。關(guān)鍵詞：新西蘭黑金鮑，黑色素，
8、轉(zhuǎn)錄組測(cè)序，熒光定量PCRV上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文PreliminaryResearchofBlackMantleandMuscleoftheNewZealandHaliotisirisABSTRACTNewZealand'sHal
