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1、分類號：Q42密級：公開學(xué)校代碼：11065學(xué)號：2014010024學(xué)術(shù)博士學(xué)位論文正常及帕金森病模型大鼠蒼白球腺苷A2A受體的電生理效應(yīng)及機(jī)制研究作者姓名刁匯玲指導(dǎo)教師陳蕾教授學(xué)科神經(jīng)生物學(xué)培養(yǎng)單位醫(yī)學(xué)部基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院答辯日期2018年5月18日正常及帕金森病模型大鼠蒼白球腺苷A2A受體的電生理效應(yīng)及機(jī)制研究摘要蒼白球（globuspallidus，GP），相當(dāng)于靈長類動物的蒼白球外側(cè)段（theexternalglobuspallidus，GPe），是基底神經(jīng)節(jié)間接通路的重要核團(tuán)，在生理和病理狀態(tài)下對機(jī)體運(yùn)動起著重要的調(diào)控作用，其作用
2、與蒼白球神經(jīng)元的自發(fā)放電活動密切相關(guān)。帕金森病是由基底神經(jīng)節(jié)黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性壞死引起的運(yùn)動障礙性疾病，在此病中蒼白球神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率和放電模式有明顯的改變。蒼白球腺苷A2A受體主要分布于來自紋狀體的抑制性γ-氨基丁酸（gama-aminobutyricacid，GABA）能神經(jīng)纖維末梢。有研究通過離體腦片膜片鉗技術(shù)，證實(shí)蒼白球腺苷A2A受體激活后對蒼白球內(nèi)GABA的釋放具有促進(jìn)和抑制的雙向調(diào)控作用，但目前仍未有文獻(xiàn)報(bào)道腺苷A2A受體能調(diào)控在體蒼白球神經(jīng)元的活動。目的：首先，觀察腺苷A2A受體選擇性激動劑與拮抗劑對正常和6-羥
3、基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）單側(cè)損毀帕金森病模型大鼠蒼白球神經(jīng)元自發(fā)放電活動的影響，并分析在此過程中腺苷A2A受體與多巴胺D2受體的關(guān)系；其次，探討腺苷A2A受體對大鼠蒼白球神經(jīng)元自發(fā)放電作用的機(jī)制；再者，觀察腺苷A2A受體對正常和6-OHDA單側(cè)損毀帕金森病模型大鼠運(yùn)動行為的影響。最后，觀察腺苷A2A受體在正常和帕金森病模型大鼠蒼白球內(nèi)的表達(dá)情況。方法：三管微電極在體細(xì)胞外電生理記錄、提升軀體搖擺實(shí)驗(yàn)、6-OHDA單側(cè)損毀帕金森病模型大鼠的制備、免疫組織化學(xué)技術(shù)。結(jié)果：1．為觀察腺苷A2A受體激活后對
4、在體正常大鼠蒼白球神經(jīng)元自發(fā)放電的影響，利用在體細(xì)胞外電生理技術(shù)，記錄到47個(gè)正常大鼠蒼白球神經(jīng)元，微量加壓注射腺苷A2A受體選擇性激動劑1μMCGS21680可使其中21個(gè)神經(jīng)元的放電頻率平均降低46.08±5.71%；而使另外7個(gè)神經(jīng)元的放電頻率平均升高50.80±20.68%；在剩余的19個(gè)神經(jīng)元無明顯變化。生理鹽水對照組中的12個(gè)蒼白球神經(jīng)元，在微量加壓注射無菌生理鹽水后其放電頻率平均升高3.95±1.78%。CGS21680對蒼白球神經(jīng)元的抑制和興奮效應(yīng)分別與生理鹽水對照組相比差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=4.72，P<0.0
5、01；Z=3.47，P<0.01）。為探討內(nèi)源性腺苷是否通過腺苷A2A受體調(diào)控蒼白球神經(jīng)元放電活動，我們觀I察了腺苷A2A受體選擇性拮抗劑KW6002和SCH442416對蒼白球神經(jīng)元自發(fā)放電活動的作用。KW6002（1μM）使27個(gè)神經(jīng)元中的11個(gè)（40.74%）放電頻率平均升高29.48±10.76%，與生理鹽水對照組（5.15±2.79%，n=7）相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=2.94，P<0.05）；而另外4個(gè)（14.81%）神經(jīng)元的放電頻率從9.81±4.50Hz降低為6.82±3.67Hz，但加藥前后無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（t=1.68
6、，P>0.05）；剩余的12個(gè)無明顯變化。為進(jìn)一步驗(yàn)證內(nèi)源性腺苷能否通過腺苷A2A受體調(diào)控蒼白球神經(jīng)元自發(fā)放電活動，蒼白球內(nèi)微量加壓注射另一種腺苷A2A受體選擇性拮抗劑SCH442416。SCH442416（1μM）使20個(gè)（20/34，58.82%）蒼白球神經(jīng)元的放電頻率平均升高44.41±6.56%，明顯高于生理鹽水對照組（3.01±1.74%，n=11），兩組之間具有顯著差異性（Z=3.65，P<0.001）；其余14個(gè)無明顯變化。比較顯示SCH442416對蒼白球神經(jīng)元的興奮效應(yīng)較KW6002強(qiáng)，兩組之間有顯著性差異（Z=2.
7、15，P<0.05）。為觀察CGS21680是否通過腺苷A2A受體調(diào)控正常大鼠蒼白球神經(jīng)元放電活動，在記錄到的17個(gè)正常大鼠蒼白球神經(jīng)元，聯(lián)合微量注射1μMCGS21680和1μMKW6002只使其中5個(gè)神經(jīng)元的自發(fā)放電頻率平均降低13.93±2.96%，與CGS21680組（46.08±5.71%，n=21）相比有顯著性差異（Z=2.83，P<0.01）。與KW6002相似，1μMSCH442416也部分阻斷了CGS21680對蒼白球神經(jīng)元的抑制效應(yīng)。此外，KW6002和SCH442416還可部分阻斷CGS21680對蒼白球神經(jīng)元的
8、興奮效應(yīng)。2．在6-OHDA單側(cè)損毀帕金森病模型大鼠在體細(xì)胞外記錄實(shí)驗(yàn)中，損毀側(cè)記錄到44個(gè)蒼白球神經(jīng)元，其平均放電頻率為7.94±0.98Hz，明顯低于正常大鼠（14.02±1.44Hz，n=47，t=3.48，P<0
