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《酶解法從豬皮中提取膠原的工藝優(yōu)選》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)第17卷第4期2011年2月中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志ChineseJoumalofExperimentalTraditionalMedicalFo兀nulaeV01．17．No．4Feb．．20ll酶解法從豬皮中提取膠原的工藝優(yōu)選張路，代龍‘，楊田義，王徽(山東中醫(yī)藥大學(xué)，濟(jì)南250355)[摘要】目的：篩選蛋白酶酶解豬皮制備膠原的最佳工藝；方法：以膠原得率為指標(biāo)，采用單因索試驗(yàn)及正交試驗(yàn)對(duì)酶解條件進(jìn)行優(yōu)選；結(jié)果：胃蛋白酶用量為3％，酶解液pH2．0，底物質(zhì)量濃度l：28，溫度O℃，酶解時(shí)間48h時(shí)膠原的得率最高；結(jié)論：胃蛋白酶酶解豬皮制備膠原的工藝較好。[關(guān)鍵詞】
2、酶解法；胃蛋白酶；豬皮；膠原【中圖分類號(hào)】R283．6[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-9903(2011)04抑008講optimizationofExtractionProcessOfCollagenfromPigskinbyEnzymeHydrolysisZHANGLu。DAILong‘。YANGT詛n—yi，WANGHui(5^n凡do，IgDh矗帕，苫i鈔礦nid如ion口Zc^i凡eseMed如ine，以n口n250355，C．Ili凡口)[Abstract]objective：Screentheoptimumpreparationforcollage
3、nbyenzymehydrolysis．Method：Enzy-maticconditionwasoptimizedbysingle—factorexperimentsandtheorthogonaldesignwithcollagenyieIdasthein-dex．ResuIt：TheoptimumextI．a(chǎn)ctionconditionwasobtainedasfollows：theratioofenzyme／substratewas3％，pH2．0，material-Iiquidratiol：28，enzymatichydrolyzedfor48hat0℃．C
4、oncIusion：Preparationforpigskincollagenbypepsinisbetter．[Keywords]enzymatic；pepsin；porcineskin；collagen近年來(lái)，膠原作為藥物載體在醫(yī)藥領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用，如治療局部組織感染的膠原膜、用于創(chuàng)面止血的膠原海綿等等。膠原是由三股左手螺旋的多肽鏈互相纏繞而成，這些肽鏈被稱為儀．肽鏈，相對(duì)分子質(zhì)量在300×103左右oo。膠原的三螺旋結(jié)構(gòu)受溫度的影響很大，在15—95℃的升溫過(guò)程中，肽鏈之間的氫鍵斷裂．導(dǎo)致膠原分子解旋，分子結(jié)構(gòu)從有序態(tài)變?yōu)闊o(wú)序態(tài)忙1。由于具有完整三螺旋結(jié)構(gòu)的膠
5、原才有生物活性。因此，提取膠原的關(guān)鍵就是保護(hù)三螺旋結(jié)構(gòu)不被破壞。本研究建立了一種采用胃【收稿日期】[基金項(xiàng)目】[第一作者】【運(yùn)訊作者】·8·20lo(H27(013)國(guó)家“十一五”科技支撐計(jì)劃(加嘔BAl53肋_(dá)73)張路．在讀碩士研究生，研究方向：中藥藥荊新技術(shù)、新劑璺．E．mail：zIl蚰鼻Iu3098@163．c咖’代龍，教授．磺士研究生導(dǎo)師．Tel：13156189167．E·mail：d“Iongdailong@263．Ⅱet蛋白酶酶解豬皮制備膠原的方法，膠原提取工藝高效簡(jiǎn)潔，適合規(guī)模化生產(chǎn)。l材料1．1儀器Lc．20lOA型高效液相色譜儀(日本島津)，K
6、Rl00—5C18(4．6mmx150mm，5斗m)，DYY_6C型電泳儀(北京市六一儀器廠)?！?．2試劑與藥材甲醇(天津四友生物醫(yī)學(xué)有限公司)為色譜純；其余均為分析純；水為重蒸水；豬皮(購(gòu)自濟(jì)南維爾康肉制品廠，冷凍鮮品，符合食品標(biāo)準(zhǔn)，水分65％，總灰分0．67％，脂肪3．89％)。胃蛋白酶(批號(hào)090505，酶活力l：3000，上海藍(lán)季科有限公司)；胰酶(批號(hào)F20071130，酪蛋白轉(zhuǎn)化力≥25％，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；木瓜蛋白酶(批號(hào)090815，30萬(wàn)U·g～，上海藍(lán)季科有限公司)；己．羥脯氨酸對(duì)照品(批號(hào)ll1578-20020l，中國(guó)藥品生物制品檢
7、定所，供含量測(cè)定用)；SDS-PAGE高、次高分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白(購(gòu)自中科院上海生物化學(xué)萬(wàn)方數(shù)據(jù)張路，等：酶解法從豬皮中提取膠原的工藝優(yōu)選研究所)。2方法與結(jié)果膠原制備工藝流程：去毛脫脂的豬皮碎屑一加酶攪拌酶解一殺酶一鹽析_+脫鹽一酸復(fù)溶一鹽析_+脫鹽一干燥_成品膠原。2．1不同蛋白酶的考察考察木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰酶對(duì)豬皮膠原得率的影響。酶解條件為：酶用量(蛋白酶占豬皮干重的比例)2％，溫度0℃，底物質(zhì)量濃度l：20，pH2．5，酶解48h，得率分別為33．35％。39．45％，26．46％，胃蛋白酶的得率最高，因此對(duì)胃蛋白酶限制性酶解的條件進(jìn)行優(yōu)選
