固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)植酸酶的研究(1)

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1、營(yíng)養(yǎng)保健固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)植酸酶的研究韓建春12,陳成(1.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院,哈爾濱150030;2.黑龍江省輕工科學(xué)研究院,哈爾濱150001)摘要:闡述以AS3.4309為出發(fā)菌株,采用紫外線和EB的復(fù)合誘變獲得植酸酶高產(chǎn)菌AS3.4309-12作為發(fā)酵菌株。確定液體種子最佳發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度30℃,搖瓶速度為210r/min,裝液量為50mL/250mL三角瓶,pH5.5,培養(yǎng)基為5%的玉米淀粉和0.5%(NH4)2SO4,孢子接種量2%。確定最佳固態(tài)發(fā)酵條件:發(fā)酵溫度30℃,玉米面和麩皮比例4∶6,最初pH5,培養(yǎng)基水分5

2、1.3%,液體種子接種量5%,發(fā)酵時(shí)間108h。關(guān)鍵詞:誘變;植酸酶;孢子;發(fā)酵中圖分類(lèi)號(hào):TS205.5文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):1005-9989(2008)10-0266-05StudyonprocessingphytasebysolidfermentHANJian-chun1,CHENCheng2(1.CollegeofFoodScience,NortheastAgricultureUniversity,Harbin150030;2.HeilongjiangLightIndustryAcademe,Harbin150001)

3、Abstract:AspergillusnigerAS3.4309wasinducedmutagenesisbyUVandEB.WegottheculturestartsofhighsecretionphytaseAS3.4309-12.Parametersoffermentculturestartersconditionswere30℃,210r/min,pH5.5,cornstarch5%,0.5%(NH4)2SO4,inoculatecapacity2%.Finallywegotthebestparametersofsoli

4、dfermentphytase:30℃,pH5,inoculatecapacity5%,watercapacity51.3%,cornflourtobranis4:6,fermenttimeis108h.Keywords:induce;phytase;spore;ferment植酸學(xué)名為肌醇六磷酸,化學(xué)名稱為環(huán)己六醇出的磷達(dá)250萬(wàn)t之多,是水體富營(yíng)養(yǎng)化污染的主磷酸酯,分子式為C要原因之一[2]6H18O24P6,它是一種淡黃色或淡。褐色的黏稠液體,溶于水、乙醇和丙酮。植酸廣泛植酸酶的來(lái)源有兩種,一是植物性飼料本身含地分布于植物性

5、飼料中,植酸本身的毒性很小,但有一定數(shù)量的內(nèi)源性植酸酶,種子萌發(fā)時(shí),植酸酶被有較強(qiáng)的抗?fàn)I養(yǎng)作用,植酸帶負(fù)電荷,具有強(qiáng)大的激活并水解種子中的植酸,釋放磷元素,供植物生長(zhǎng)鰲合能力,其作用的pH范圍很廣,尤其在酸性至需要。另外,微生物發(fā)酵也可產(chǎn)生植酸酶。由于植物中性范圍內(nèi)(與胃腸pH范圍一致),其螯合作用更顯和動(dòng)物來(lái)源的植酸酶不能形成生產(chǎn)規(guī)模,并且作用范著[1,4]圍沒(méi)有微生物來(lái)源廣泛,穩(wěn)定性也比微生物來(lái)源差,。植物中的磷大部分(60%~70%)以植酸磷的形式存在,單胃動(dòng)物消化道中無(wú)植酸酶,飼料中大量的因此目前研究都集中于微生物植酸酶[

6、3]。本項(xiàng)目以黑植酸磷不能被利用而隨糞便排入環(huán)境,既浪費(fèi)資源,曲霉AS3.4309為出發(fā)菌株,通過(guò)一系列誘變手段獲又對(duì)環(huán)境造成了磷污染,我國(guó)每年從畜禽糞便中排得高產(chǎn)菌株,并以玉米為主要原料的培養(yǎng)基進(jìn)行固態(tài)收稿日期:2008-07-08作者簡(jiǎn)介:韓建春(1973—),男,博士。266No.10.2008營(yíng)養(yǎng)保健發(fā)酵,進(jìn)行生產(chǎn)微生物植酸酶。(1)粗篩:由于平板培養(yǎng)基以不溶性植酸鈣為唯一磷源,這就使得平板呈現(xiàn)白色混濁。用移液槍1材料與方法吸取0.1mL誘變劑處理的孢子懸液(可適當(dāng)稀釋)1.1材料涂于平板后,黑曲霉產(chǎn)生的植酸酶使菌落周?chē)?/p>

7、現(xiàn)1.1.1菌種黑曲霉AS3.4309:中科院微生物研究所。明顯的透明圈,挑取透明圈直徑與菌落直徑比值大1.1.2主要儀器隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱、超凈工作的菌落。臺(tái):上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠;101-2型電熱鼓風(fēng)干燥(2)復(fù)篩:初篩得到的產(chǎn)酶菌株經(jīng)斜面活化后,箱:中國(guó)河北黃驊航天儀器廠;ZD-880振蕩器:哈按下述培養(yǎng)方法培養(yǎng),進(jìn)行酶活測(cè)定,突變株與對(duì)爾濱東聯(lián)電子有限公司;座式自動(dòng)電熱壓力蒸氣滅照菌株相比較,相對(duì)酶活≤90%的為負(fù)突變株,相對(duì)菌器:上海申安醫(yī)療器械廠;電子天平:北京賽多利酶活≥110%的為正突變株,相對(duì)酶活在90%～110

8、%斯儀器系統(tǒng)有限公司。的視為等性突變菌株。搖瓶培養(yǎng)條件為:250mL三1.1.3化學(xué)試劑蔗糖、葡萄糖、硝酸鈉、氯化鉀、角瓶裝液量50mL,接種兩環(huán)孢子,于30℃,210r/硫酸鎂、硫酸亞鐵、磷酸二氫鉀、氯化鈉、碳酸鈣:min旋轉(zhuǎn)式搖床上培養(yǎng)4d,根