資源描述：
《可降解多孔型絲素蛋白%2f羥基磷灰石制備及其修復(fù)骨缺損實(shí)驗(yàn)的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、蘇州大學(xué)博士學(xué)位論文可降解多孔型絲素蛋白/羥基磷灰石的制備及其修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究姓名：王根林申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：骨外科學(xué)指導(dǎo)教師：楊惠林20080501可降解多孔犁絲素蚩白／羥基磷灰石的制備及其修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要第一部分可降解多孑L型絲素蛋白／羥基磷灰石的制備及其在SD大鼠體內(nèi)降解的實(shí)驗(yàn)觀察【目的】制備絲素蛋白／羥基磷灰石(silkfibroin／hydroxyapatite，SF／HA)復(fù)合人工骨材料，并將該材料植入生物體內(nèi)降解，以了解SF／HA在動(dòng)物體內(nèi)的降解速率及機(jī)體對(duì)SF／HA的組織學(xué)反應(yīng)，
2、為后續(xù)成骨實(shí)驗(yàn)提供可靠的參考數(shù)據(jù)?！痉椒ā恳孕Q絲絲素蛋白作為羥基磷灰石沉積的模板，以家蠶絲素短纖維為增強(qiáng)材料，以NaCl為致孔劑，采用等靜壓的方法制備4種SF／HA復(fù)合多孔材料。以羥基磷灰石為對(duì)照組，測(cè)定4種SF／HA復(fù)合材料及羥基磷灰石在O．5h、2h、6h、12h及24h不同時(shí)間點(diǎn)的吸水率。將4種SF／HA復(fù)合材料及羥基磷灰石植入SD大鼠背部皮下，進(jìn)行體內(nèi)降解觀察。實(shí)驗(yàn)組分別于術(shù)后2、6、12、16、20及24周取材，對(duì)照組分別于術(shù)后2、12及24周取材，進(jìn)行大體觀察及組織學(xué)檢查?！窘Y(jié)果】絲素蛋白、HA、添加劑
3、及致：fL齊JJ配比不同，制備的4種SF／HA人工骨材料的孔徑、孔隙率及強(qiáng)度等也不同。材料吸水率趨勢(shì)如下：SF／HA3、SF／HA4>SF／HA2、SF／HAI>HA。HA、SF／HAI及SF／HA2降解十分緩慢或基本不能降解；SF／HA320"--,24周降解完畢；SF／HA412,--．,16周降解完畢；各種材料周?chē)M織未見(jiàn)明顯變性壞死等。【結(jié)論】SF／HAl平均孔徑為6．5岬，最大孔徑也只有151．tin，不適合骨組織工程支架材料的要求。SF／HA4雖然孔徑、孔隙率滿足要求，但力學(xué)強(qiáng)度較低，壓縮強(qiáng)度只有1．5
4、9MPa，在水中很快散開(kāi)，也不適合骨組織工程的要求。故在后續(xù)的試驗(yàn)中，我們剔除這兩種材料，將對(duì)SF／HA3及SF／HA2兩種材料進(jìn)行體外細(xì)胞相容性研究?！娟P(guān)鍵詞】絲素蛋白／羥基磷灰石；生物降解；體內(nèi)實(shí)驗(yàn)第二部分免骨髓基質(zhì)細(xì)胞的分離培養(yǎng)及其成骨誘導(dǎo)分化的實(shí)驗(yàn)研究’【目的】體外分離培養(yǎng)兔骨髓基質(zhì)細(xì)胞(bonemarrowstromalcells，BMSCs)，并向成骨方向誘導(dǎo)培養(yǎng)，為SF／HA相容性提供檢測(cè)細(xì)胞及為SF／HA組織工程化骨提可降解多孔型絲素蛋白／羥基磷灰石的制備及其修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要供適宜的種子
5、細(xì)胞?！痉椒ā砍槿⌒挛魈m白兔的骨髓5ml，通過(guò)密度梯度離心法獲取BMSCs，體外貼壁培養(yǎng)、擴(kuò)增、傳代，倒置顯微鏡下觀察原代及各代細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量生長(zhǎng)情況，描繪生長(zhǎng)曲線。第2代細(xì)胞用含1x10-89／1地塞米松、10mmol／l13·甘油磷酸鈉及50I．tg／!L．抗壞血酸的條件培養(yǎng)液將其定向成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)、擴(kuò)增。采用倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化；采用MTT法測(cè)定細(xì)胞增殖情況；使用堿性磷酸酶染色及VonKossa鈣結(jié)節(jié)染色等方法，鑒定其成骨性能。【結(jié)果】BMSCs在培養(yǎng)皿中貼壁生長(zhǎng)、增殖，條件培養(yǎng)液誘導(dǎo)后表現(xiàn)出明顯的成
6、骨活性，細(xì)胞增殖良好，體外礦化結(jié)節(jié)VonKossa染色陽(yáng)性、堿性磷酸酶染色陽(yáng)性，證實(shí)其有成骨潛能?！窘Y(jié)論】可以通過(guò)體外分離純化兔BMSCs，在一定條件下能夠向成骨方向誘導(dǎo)分化，并能使細(xì)胞保持較高的成骨活性，適于作為材料相容性的檢測(cè)細(xì)胞及構(gòu)建組織工程化骨的種子細(xì)胞?！娟P(guān)鍵詞】骨髓基質(zhì)細(xì)胞；細(xì)胞培養(yǎng)；成骨細(xì)胞；兔第三部分可降解多子L型絲素蛋白／羥基磷灰石復(fù)合人工骨材料的細(xì)胞相容性研究【目的】以成骨誘導(dǎo)的BMSCs作為檢測(cè)細(xì)胞，與兩種絲素蛋白／羥基磷灰石(SF／HA)進(jìn)行體外復(fù)合培養(yǎng)，檢測(cè)SF／HA的細(xì)胞相容性。【方法】
7、將兔BMSCs體外成骨誘導(dǎo)至第3代，接種到預(yù)濕的SF／HA2及SF／HA3材料上復(fù)合培養(yǎng)，以單純BMSCs相同條件下培養(yǎng)作為對(duì)照。通過(guò)相差顯微鏡、掃描電鏡及HE染色等方法觀察細(xì)胞在材料中的生長(zhǎng)情況。以MTT法檢測(cè)材料對(duì)細(xì)胞增殖活性的影響，以堿性磷酸酶活性測(cè)定評(píng)價(jià)其成骨能力，以材料浸提液的細(xì)胞毒性試驗(yàn)評(píng)估材料是否有細(xì)胞毒性?！窘Y(jié)果】掃描電鏡及組織學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞材料復(fù)合后，BMSCs在SF／HA2及SF／HA3上能夠良好地粘附和增殖。ALP活性測(cè)定及MTT法測(cè)定OD值均證實(shí)，BMSCs細(xì)胞活性及成骨性能不受材料影響，
8、與對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>O．05)。材料浸提液細(xì)胞毒性試驗(yàn)顯示，細(xì)胞毒性分級(jí)均為0～I(xiàn)級(jí)，兩種SF／HA浸提液對(duì)細(xì)II可降解多孔型絲素蛋白／羥基磷灰石的制備及其修復(fù)骨缺損的實(shí)驗(yàn)研究中文摘要胞生長(zhǎng)基本無(wú)毒性作用?！窘Y(jié)論】SF／HA2與SF／HA3對(duì)BMSCs的生長(zhǎng)和成骨功能無(wú)影響，具有良好的細(xì)胞相容性，具有構(gòu)建組織工程化骨的可行性?！娟P(guān)鍵詞】生物相
