檸條錦雞兒功能未知基因cκcaad1的克隆及亞細(xì)胞定位

檸條錦雞兒功能未知基因cκcaad1的克隆及亞細(xì)胞定位

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時間:2019-03-07

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1、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包括其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果,也不包括為獲得我?;蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料,與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學(xué)位論文與資料若有不實之處,本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名:日期:加/驢.么./0內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識產(chǎn)權(quán)的規(guī)定,即:研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識產(chǎn)權(quán)單位屬內(nèi)蒙古

2、農(nóng)業(yè)大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后,發(fā)表論文或使用論文工作成果時署名單位為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué),且導(dǎo)師為通訊作者,通訊作者單位亦署名為內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子文檔,允許論文被查閱和借閱。學(xué)??梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外),采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名:趣箍指導(dǎo)教師簽名:查!丑蝠日期:迎絲:笸:Z星摘要檸條錦雞兒是我國西北部干旱荒漠地區(qū)生長的豆科錦雞兒屬灌木,是一種重要的造林樹種和飼用植物。檸條錦雞兒具有極強(qiáng)的耐逆境能力,是研究植物抗逆的優(yōu)良材料。目前對檸條錦雞兒的研究還主要集中在防風(fēng)固沙和飼用的栽培上

3、,對其生理生化以及抗逆分子機(jī)制方面的研究還較少,只很少幾個檸條錦雞兒抗旱基因被克隆。CAAD結(jié)構(gòu)域最早在藍(lán)細(xì)菌的氨酰tRNA合成酶中發(fā)現(xiàn)并開始被研究,是~個未知功能的結(jié)構(gòu)域,在細(xì)菌和真核細(xì)胞中也有發(fā)現(xiàn)。這個結(jié)構(gòu)域在多種氨酰一tRNA合成酶中作為獨立的結(jié)構(gòu)域存在,是氨酰一tRNA合成酶定位于類囊體膜所必需的。本研究從干旱處理后的檸條錦雞兒抑制差減雜交文庫中克隆得到~個基因。生物信息學(xué)分析表明:該基因序列全長140lbp,有5個外顯子和4個內(nèi)含子,預(yù)測可編碼CAAD結(jié)構(gòu)域,因此命名為強(qiáng)CAADI。同時,構(gòu)建了CkCAADl基因與熒光蛋白GFP融合的表達(dá)載體,利用擬南芥瞬時表達(dá)

4、系統(tǒng),觀察到該蛋白定位于葉綠體中。此外,對CkCAAI)I基因在干旱條件下的表達(dá)情況進(jìn)行了’qRT-PCR分析。結(jié)果顯示,該基因在干旱處理后1小時表達(dá)量輕微上升,之后隨著時間的推移,表達(dá)量逐漸下降。為了進(jìn)一步研究該基因的功能,構(gòu)建了由35S啟動子驅(qū)動的融合有HA標(biāo)簽的過表達(dá)載體,并進(jìn)行了擬南芥的遺傳轉(zhuǎn)化,目前正在篩選過表達(dá)純合體株系。關(guān)鍵詞:檸條錦雞兒;干旱;CkCAADI基因;亞細(xì)胞定位;CloningandSubcellularLocalizationofanFunctionUnknownGeneCkCAADlfromCaraganakorshinskiiKom.Ab

5、stractCaraganakorshinskiiiswidelydistributedinthenorthwestdesertofChina.It’Susuallyraisedtoprotectenvironment,fixdesertificationandfeedanimals。C.korshinskiihasastrongtolerancetoabioticstress,therefore,it’Sextremelysuitableforstudyingplantstresstolerance.ManyinvestigationsaboutC.korshinski

6、ifocusonitscultivation,littleisaboutitsphysiology,biochemistryandthemolecularmechanismsinstresstolerance.Sofar,onlyseveralgenesresponsivetOdroughtinC.korshinskiiwasclonedandanalyzed.CAADdomainwasinitiallydiscoveredinaminoacyl—tRNAsynthetase(aaRS),itsfunctionstillremainsunknown。Previousdat

7、ashowedthatCAADdomainalsofoundinbacteriaandeukaryon,it’StheuniquedomaininfourkindsofaaRS,moreover,it’SessentialfortheseaaRStolocalizeinthylakoidmembrane.Agenefromthesuppressionsubtractivehybridization(SSH)libraryofC.korshinskiiunderdroughttreatmentwasclonedandanalyz

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