tlr2在hmgb1誘導的小鼠系膜細胞增殖中的作用及其可能機制

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1、河北醫(yī)科大學學位論文使用授權及知識產權歸屬承諾一本學位論文在導師(或指導小組)的指導下，由本人獨立完成。本學位論文研究所獲的研究成果，其知識產權歸河北醫(yī)科大學所有。河北醫(yī)科大學有權對本學位論文進行交流、公開和使用。凡發(fā)表與學位論文主要內容相關的論文，第一署名單位為河北醫(yī)科大學，實驗材料、原始數(shù)據(jù)、申報的專利等知識產權均歸河北醫(yī)科大學所研究生躲儈氣新I?刻I,I研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本論文是在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特別加以標注等內容外，文中不包含其他人已經發(fā)表或撰寫的研究成果，指導教師對此進行了審

2、定。本論文由本人獨立撰寫，文責自負。研究生簽名：名象勾導師簽章：剖伽旅、名，多年夕月)尸目目錄中文摘要????????????????????．．????1英文摘要?????????????????????????5研究論文TLR2在HMGBl誘導的小鼠系膜細胞增殖中的作用及其可能機制前言???????????????????????????????10日U舌???????????????????????????????lO材料與方法?????????????????????一11結果????????????????????

3、???????????20附圖???????????????????????????????22附表???????????????????????????????28討論???????????????????????????????31結論???????????????????????????????34參考文獻?????????????????????一34綜述肌GBl一一個風濕性疾病的危險信號????????·38致謝?????????????????????????????????’51個人簡歷????????????

4、????????????52中文摘要TLR2在HMGBl誘導的小一系膜闞朐哺殖中的作用及其可能機制搐要目的：本實驗以小鼠系膜細胞為研究對象，以重組鼠HMGBl為刺激物，試圖通過檢測其受體Toll樣受體2(TLR2)的誘導表達情況及沉默其受體后，細胞增殖及細胞周期相關蛋白的表達變化，初步探討HMGBl通過其受體對系膜細胞的促增殖作用。系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemiclupuserythematosus，SLE)是一種慢性炎癥性自身免疫性疾病，其特征是多器官受累，產生抗核抗體及免疫復合物的沉積【lJ。狼瘡性腎炎(Lupusnep

5、hritis，LN)被視為SLE最嚴重之一的器官表現(xiàn)，影響約35％至50％的狼瘡患者。盡管對其發(fā)病機制有了深入的了解，其臨床治療效果越來越好，但狼瘡性腎炎仍是SLE患者死亡的主要原因。高遷移率族蛋白一1(rnghmobilitygroupprotein-1，HMGB1)是一個被發(fā)現(xiàn)在所有哺乳動物細胞的核內蛋白，被稱為DNA結合蛋白，參與染色質結構和基因轉錄的調控【21。而細胞外HMGBl已被確定為一種炎癥介質，由于其促炎性和免疫刺激特性，參與多種慢性炎癥和自身免疫性疾病的發(fā)病【3】。HMGBl不但由活化的免疫細胞主動分泌(如

6、巨噬細胞和單核細胞)，而且也被動地從損傷或壞死細胞中釋放【4】。此外，HMGBl誘導產生其它細胞因子如腫瘤壞死因子和白細胞介素．1(IL．1)、IL一6和IL．8，并且它還是一種內皮細胞的激活劑，導致粘附分子的上調。研究發(fā)現(xiàn)，在不同的炎癥性疾病中如敗血癥、類風濕性關節(jié)炎、抗中性粒細胞胞質．MATIC抗體(ANCA)相關性血管炎、慢性腎臟疾病以及SLEt5】均伴有血清中HMGBl表達升高。另外，與活動性狼瘡(非腎臟損害)的患者相比，在活動性狼瘡性腎病患者血清中HMGBl水平明顯增高【6】。我們前期的實驗中檢測了HMGBl及其可

7、能受體TLR2、4在狼瘡性腎炎患者外周血及狼瘡小鼠腎組織中的表達情況，結果顯示，HMGBl及TLR2、4在狼瘡性腎炎發(fā)病過程中明顯高表達，同時與系膜細胞的增生密切相關，推斷HMGBl可能通過與其受體結合參與了狼瘡時系膜細胞的異常增殖，促進了增生性腎小球’腎中文摘要炎的發(fā)生，但其確切機制，目前尚不清楚。方法：選取小鼠系膜細胞MMC為研究對象，1)為了確定HMGBl對小鼠系膜細胞增殖的影響，將小鼠系膜細胞隨機分為正常對照組及501．tg／LHMGB1刺激組、100}tg／LHMGB1刺激組和200btg／LHMGB1刺激組，分別

8、培養(yǎng)2、4、8和12h，收集不同時間點不同濃度刺激的細胞，以BrdU摻入法檢測小鼠系膜細胞的增殖水平。2)為了檢測HMGBl對小鼠系膜細胞TLR2、PCNA、CyclinD1、CDK4、p16表達的影響，將常規(guī)培養(yǎng)的MMC細胞隨機分為正常對照組及100l_tg／LHMGBl刺激組，分別于培