甲狀腺素受體介導(dǎo)甲狀腺素調(diào)控牙鲆變態(tài)的研究

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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號(hào)：D140103012上海海洋大學(xué)博士學(xué)位論文甲狀腺素受體介導(dǎo)甲狀腺素調(diào)控牙題目：鲆變態(tài)的研究Analysisofthyroidhormonereceptor英文題目：mediatingthyroidhormoneregulationofmetamorphosisinJapaneseflounder(Paralichthysolivaceus)專業(yè)：生物學(xué)研究方向：魚(yú)類發(fā)育生物學(xué)姓名：喻杰指導(dǎo)教師：施志儀教授二O一八年5月23日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指

2、導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫(xiě)，我對(duì)所寫(xiě)的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海水產(chǎn)大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用

3、本版權(quán)書(shū)。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)博士學(xué)位論文答辯委員會(huì)成員名單姓名工作單位職稱備注羅祖玉復(fù)旦大學(xué)教授主席吳超群復(fù)旦大學(xué)教授委員李名友上海海洋大學(xué)教授委員張俊玲上海海洋大學(xué)副教授委員李文娟上海海洋大學(xué)副教授委員付元帥上海海洋大學(xué)副教授秘書(shū)答辯地點(diǎn)水產(chǎn)與生命學(xué)院C樓217答辯日期2018.05.23上海海洋大學(xué)博士論文甲狀腺素受體介導(dǎo)甲狀腺素調(diào)控牙鲆變態(tài)的研究摘要甲狀腺素（thyroidhormone，TH）是一類氨基酸衍生物，在個(gè)體發(fā)育、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、細(xì)胞增殖和分化等方面均有廣泛的作用。牙鲆（Pa

4、ralichthysolivaceus）在我國(guó)是一種重要的海洋經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖魚(yú)類，其從仔魚(yú)到稚魚(yú)的轉(zhuǎn)變中經(jīng)歷一個(gè)劇烈的變態(tài)發(fā)育過(guò)程，伴隨著身體對(duì)稱性的失去和眼睛的移位等等，該過(guò)程受甲狀腺素的調(diào)控。業(yè)已證實(shí)，甲狀腺素通過(guò)甲狀腺素受體（thyroidhormonereceptor，TR）誘導(dǎo)加速牙鲆仔魚(yú)的變態(tài)。但到目前為止，關(guān)于甲狀腺素調(diào)控仔魚(yú)變態(tài)的機(jī)制知之甚少。本文從三個(gè)方面展開(kāi)研究，主要結(jié)果如下：1、牙鲆變態(tài)過(guò)程中甲狀腺素受體和脫碘酶表達(dá)的關(guān)系為研究外源性TH對(duì)牙鲆變態(tài)期間脫碘酶和甲狀腺素受體的影響，筆者將15dph（15daysposthatch，出膜后15天）的仔魚(yú)

5、隨機(jī)分成3組：正常對(duì)照組（normalcontrol，NC）、TH處理組和TU（thiourea，硫脲）處理組，飼養(yǎng)直至41dph。為了評(píng)估用TU處理的牙鲆是否可以通過(guò)外源性TH來(lái)拯救其變態(tài)，筆者在35dph（NC組牙鲆已經(jīng)完成變態(tài)）時(shí)設(shè)計(jì)了拯救實(shí)驗(yàn)，將TU組的幼體分成3組：TU組繼續(xù)在含硫脲的海水中飼養(yǎng)，TU+NC組轉(zhuǎn)入天然海水中飼養(yǎng)，TU+TH組轉(zhuǎn)入含有外源性甲狀腺素的海水中飼養(yǎng)。利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-qPCR）檢測(cè)了3個(gè)甲狀腺素受體TRαA、TRαB、TRβ和3個(gè)脫I上海海洋大學(xué)博士論文碘酶（deiodinases，Ds）D1、D2、D3基因mRNA

6、在各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)期的表達(dá)情況，利用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）檢測(cè)了各實(shí)驗(yàn)組各時(shí)期牙鲆幼體體內(nèi)甲狀腺素T4和T3的總體水平。結(jié)果顯示：隨著牙鲆幼體開(kāi)始進(jìn)入變態(tài)進(jìn)程（16-21dph），D1、D2、TRαA、TRαB和TRβ的表達(dá)開(kāi)始增加，體內(nèi)甲狀腺素水平亦如此；本試驗(yàn)中除去D3以外其他所有分析的對(duì)象，均在變態(tài)高峰期（25-31dph）出現(xiàn)峰值水平，此后表達(dá)水平全部以相似的趨勢(shì)下降直到變態(tài)結(jié)束（35-41dph）。不同的是，變態(tài)后TRβ轉(zhuǎn)錄水平仍然很高。D3表現(xiàn)出不規(guī)則的波浪狀表達(dá)變化趨勢(shì)，這與變態(tài)過(guò)程中

7、分析的其他對(duì)象不同。外源TH處理顯著促進(jìn)了牙鲆幼體的變態(tài)。ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，外源TH處理在變態(tài)早期增加了牙鲆體內(nèi)的TH水平，但在之后沒(méi)有明顯效果。qRT-PCR顯示D1的表達(dá)在整個(gè)變態(tài)過(guò)程中被外源TH處理下調(diào)。D2、TRαA和TRαB在變態(tài)早期被TH處理上調(diào)，隨后被下調(diào)。在變態(tài)早期和高峰期，TH處理上調(diào)了D3和TRβ的表達(dá)。與TH處理相反，TU處理抑制了牙鲆幼體的變態(tài)。本研究結(jié)果表明，TU處理在整個(gè)變態(tài)過(guò)程中都降低了牙鲆體內(nèi)的TH水平。D1在變態(tài)高峰期和變態(tài)后期受到外源TU處理的上調(diào)；D2和TRαB在高峰期被下調(diào)，高峰期后被上調(diào)；D3和TRβ在高峰期和變態(tài)后

8、期被TU處