資源描述：
《sirna抑制cortactin基因表達(dá)對(duì)喉癌hep-2細(xì)胞增殖和侵襲的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)碩士學(xué)位論文siRNA抑制cortactin基因表達(dá)對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖和侵襲的影響研究生姓名：譚桂煌指導(dǎo)教師姓名、職稱：謝海龍副教授甘潤良教授學(xué)科、專業(yè)名稱：病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向：腫瘤發(fā)病機(jī)制及防治2013年4月南華大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得南華大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的
2、同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。作者簽名：年月日南華大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文是本人在南華大學(xué)攻讀（博/碩）士學(xué)位期間在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的學(xué)位論文。本論文的研究成果歸南華大學(xué)所有，本論文的研究內(nèi)容不得以其它單位的名義發(fā)表。本人同意南華大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)校可以公布學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保留學(xué)位論文；學(xué)?？筛鶕?jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文
3、。同意學(xué)校將論文加入《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并按《中國優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫出版章程》規(guī)定享受相關(guān)權(quán)益。同意授權(quán)中國科學(xué)信息技術(shù)研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。對(duì)于涉密的學(xué)位論文，解密后適用該授權(quán)。作者簽名：導(dǎo)師簽名：年月日年月日目錄一、中文摘要……………………………………………………………1二、英文摘要……………………………………………………………2三、正文1.前言…………………………………………………………42.實(shí)驗(yàn)材料………………
4、…………………………………………63.技術(shù)路線…………………………………………………………94.實(shí)驗(yàn)方法………………………………………………………105.實(shí)驗(yàn)結(jié)果………………………………………………………196.討論………………………………………………………267.結(jié)論………………………………………………………30四、參考文獻(xiàn)…………………………………………………………31五、附錄…………………………………………………………34六、文獻(xiàn)綜述…………………………………………………………35七、碩士期間撰寫的文章
5、……………………………………………47八、致謝………………………………………………………………48siRNA抑制cortactin基因表達(dá)對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞增殖和侵襲的影響碩士研究生：譚桂煌指導(dǎo)教師：謝海龍副教授甘潤良教授中文摘要背景與目的：皮層肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白cortactin(corticalactin-bindingprotein)參與細(xì)胞骨架系統(tǒng)的調(diào)控、細(xì)胞外信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)以及細(xì)胞黏附等過程，研究表明cortactin與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)。然而，cortactin在喉癌中的重要作用還沒有被詳細(xì)的闡明。本
6、實(shí)驗(yàn)探討siRNA(smallinterferingRNA)抑制cortactin基因表達(dá)對(duì)喉癌Hep-2細(xì)胞系體外增殖和侵襲的影響。方法：利用基因重組技術(shù)構(gòu)建針對(duì)cortactin基因的小干擾RNA真核表達(dá)載體pSilencer3.1-H1neo-cortactin；用DNA測序法鑒定重組質(zhì)粒；用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染技術(shù)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hep-2細(xì)胞，同時(shí)以轉(zhuǎn)空載體組和空白組作為對(duì)照(三組細(xì)胞分別命名為pcortactin-siRNA/Hep-2，pSilencer3.1/Hep-2，Hep-2)，G418篩選出陽性細(xì)
7、胞克?。粦?yīng)用Westernblot及免疫細(xì)胞化學(xué)方法分別檢測cortactin在Hep-2中的siRNA干擾效率及定位；MTT和平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞增殖能力；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期分布情況；Transwell體外遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移侵襲能力。結(jié)果：DNA測序分析表明針對(duì)cortactin基因的重組真核表達(dá)載體pSilencer3.1-H1neo-cortactin構(gòu)建成功。免疫細(xì)胞化學(xué)方法顯示cortactin在Hep-2細(xì)胞胞漿中呈彌漫性表達(dá)，Westernblot顯示成功構(gòu)建cortactin表
8、達(dá)下調(diào)的穩(wěn)轉(zhuǎn)喉癌細(xì)胞系pcortactin-siRNA/Hep-2。與空白組Hep-2細(xì)胞比較,pcortactin-siRNA/Hep-2的cortactin含量為11.22%(P＜0.01)；細(xì)胞生長速度明顯減慢（P＜0.05）；克隆形成率降低為21.47%(P＜0.01)；細(xì)胞中S期細(xì)胞百分比明顯降低（P＜0.05）；遷移、侵襲能力顯著降低(P＜0.01)。結(jié)論：1.成功建立cortactin
