變應(yīng)性鼻炎血清蛋白質(zhì)組學(xué)的研究

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1、分類(lèi)號(hào)VDC博士學(xué)位論文密級(jí)變應(yīng)性鼻炎的血清蛋白質(zhì)組學(xué)研究ComparativeproteomicresearchlntnesernmoI一·‘●●l“allergicrhinitiscases作者姓名：呂云霞學(xué)科專(zhuān)業(yè)：耳鼻咽喉科學(xué)學(xué)院(系、所)：湘雅醫(yī)院指導(dǎo)老師：趙素萍教授答辯委員會(huì)主中南大學(xué)二O一二年五月原創(chuàng)性聲明一㈣本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。、盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得

2、中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我共同工作的同志對(duì)本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明。作者簽名：星三匿日期：塑2蘭年量月一日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書(shū)本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國(guó)家或湖南省有關(guān)部門(mén)規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。作者簽名：

3、熔導(dǎo)師簽名二蜓日期：五望年』月盟日本課題受以下基金資助：>科技部“十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目子項(xiàng)目(項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào)：2004BA720A19—01)>國(guó)家自然科學(xué)基金(項(xiàng)目批準(zhǔn)號(hào)：30973167)本研究在復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院、湘雅醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室及湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科實(shí)驗(yàn)室完成，由湘雅醫(yī)院醫(yī)學(xué)中心實(shí)驗(yàn)室及湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科實(shí)驗(yàn)室提供相關(guān)設(shè)備和技術(shù)支持。特此致謝!博士學(xué)位論文中文摘要摘要第一章變應(yīng)性鼻炎的血清蛋白組學(xué)研究及生物信息學(xué)分析目的變應(yīng)性鼻炎是一種十分常見(jiàn)的疾病，它還是哮喘的高危因素。變應(yīng)原特異性

4、免疫治療是唯一可以改變變應(yīng)性鼻炎疾病進(jìn)程的治療方法。然而，變應(yīng)性鼻炎的發(fā)病機(jī)制及其特異性免疫治療的確切機(jī)制尚未完全闡明。本研究的目的是為了篩選與常年性變應(yīng)性鼻炎發(fā)病及特異性免疫治療密切相關(guān)的調(diào)控因子及其調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)，為進(jìn)一步深入研究變應(yīng)性鼻炎及其免疫治療的作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。方法研究選取了45名確診為常年性變應(yīng)性鼻炎患者，22名經(jīng)特異性免疫治療有效患者，20名經(jīng)特異性免疫治療無(wú)效患者及20名健康志愿者作為研究對(duì)象。我們對(duì)這四組研究對(duì)象進(jìn)行了同位素標(biāo)記的相對(duì)和絕對(duì)定量的蛋白組學(xué)研究，接著利用二維凝膠電泳及質(zhì)譜分析

5、確定我們所需的差異蛋白。然后利用利用EXPANDERv5．2軟件對(duì)這些差異蛋白進(jìn)行聚類(lèi)分析。最后將聚類(lèi)后的差異蛋白匯入Metacore軟件，進(jìn)一步確認(rèn)可能起重要作用的調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)及與特異性免疫治療密切相關(guān)的蛋白作用。結(jié)果本研究共確認(rèn)了210個(gè)差異蛋白，其中188個(gè)與變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生密切相關(guān)，91個(gè)與特異性免疫治療的作用相關(guān)。通過(guò)Metacore通路軟件構(gòu)建了P值最小的lO組調(diào)節(jié)通路，其中以凝血通路的可信度最高。其中參與凝血通路的重要蛋白質(zhì)如凝血因子X(jué)II、凝血因子III、凝血酶原、儀一2巨球蛋白及纖溶酶原等在

6、四組研究對(duì)象中表達(dá)都有所改變。在變應(yīng)性鼻炎組中表達(dá)增高，經(jīng)特異性免疫治療后，在特異性免疫治療有效組中其表達(dá)下降，而在特異性免疫治療無(wú)效組中其表達(dá)升高或變化不明顯。在Metacore軟件構(gòu)建的轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)中，STAT3及STATl轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)與凝血通路的相關(guān)系數(shù)最高。結(jié)論凝血因子X(jué)II、凝血因子III、凝血酶原、0c．2巨球蛋白及纖溶酶原構(gòu)成的凝血通路很可能是變應(yīng)性鼻炎炎癥反應(yīng)的重要調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)。特異性免疫治療可能通過(guò)抑制凝血通路的活化以減輕變應(yīng)性炎癥反應(yīng)從而改善變應(yīng)性鼻炎的癥狀。而且凝血通路可能通過(guò)STAT3

7、和／或STATl轉(zhuǎn)錄因子網(wǎng)絡(luò)參與AR及特應(yīng)性免疫治療的調(diào)控。博士學(xué)位論文中文摘要第二章凝血酶Thrombin在AR血清中的鑒定目的變應(yīng)性鼻炎是鼻部常見(jiàn)的慢性炎癥性疾病，其發(fā)病機(jī)制一直以來(lái)是基礎(chǔ)和臨床研究的重點(diǎn)，但至今仍不十分清楚。第一章的研究我們已證實(shí)凝血通路的激活和抑制可能對(duì)變應(yīng)性鼻炎的炎癥反應(yīng)和特異性免疫治療的療效起著重要作用，本章中我們選擇凝血通路中起中心作用的調(diào)節(jié)因子Thrombin蛋白作為研究對(duì)象，檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎及免疫治療病人中Thrombin蛋白的表達(dá)差異。探討Thrombin蛋白在變應(yīng)性鼻炎

8、及特異性免疫治療中的意義；并檢驗(yàn)?zāi)放c變應(yīng)性鼻炎及特異性免疫治療的相關(guān)性。方法利用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)變應(yīng)性鼻炎(20例)，特異性免疫治療有效組患者(20例)及特異性免疫治療無(wú)效組患者(20例)血清中Thrombin蛋白的含量，并與健康志愿者(20例)的結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較。結(jié)果三個(gè)病例組(變應(yīng)性鼻炎、特異性免疫治療有效組、特異性免疫治療無(wú)效組)與健康對(duì)照組總體比較，進(jìn)一步對(duì)血清Thrombin水平進(jìn)行組間兩兩比較。結(jié)果顯示：