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《基于焦亡相關(guān)蛋白GSDMD介導(dǎo)的新型沙門(mén)氏菌菌蛻的制備與免疫效力評(píng)價(jià)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、分類(lèi)號(hào)：S855.1單位代碼：10193密級(jí)：公開(kāi)學(xué)號(hào)：20150519碩士學(xué)位論文基于焦亡相關(guān)蛋白GSDMD介導(dǎo)的新型沙門(mén)氏菌菌蛻的制備與免疫效力評(píng)價(jià)PreparationandImmuneEfficacyEvaluationofNovelSalmonellaGhostBasedonpyroptosisProteinGSDMD作者姓名：王曼宇學(xué)位類(lèi)別：農(nóng)學(xué)碩士專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究方向：動(dòng)物微生物與免疫學(xué)指導(dǎo)教師：劉思國(guó)研究員所在學(xué)院：動(dòng)物科學(xué)與技術(shù)學(xué)院2018年6月獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。盡我所知，除文中特別
2、加以標(biāo)注和致謝所列內(nèi)容外，論文中不包含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。本學(xué)位論文所有內(nèi)容若有不實(shí)之處，本人愿意承擔(dān)一切相關(guān)法律責(zé)任和后果。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明1、本人完全了解吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：研究生在校攻讀學(xué)位期間所完成的論文及相關(guān)成果的知識(shí)產(chǎn)權(quán)屬吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)所有，并同意將本論文的版權(quán)授權(quán)給吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)，學(xué)校有權(quán)保留送交論文的復(fù)印件和磁盤(pán)，允許論文被查閱和借
3、閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。2、本人(同意/不同意，務(wù)必打印后填寫(xiě))吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)將本論文版權(quán)授權(quán)給不同媒體進(jìn)行電子出版、多媒體出版、網(wǎng)絡(luò)出版以及其他形式出版(涉密學(xué)位論文解密后應(yīng)遵守此協(xié)議)。3、本人聲明畢業(yè)后若發(fā)表在攻讀研究生學(xué)位期間完成的論文及相關(guān)的學(xué)術(shù)成果，必須以吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)作為第一署名單位。學(xué)位論文作者簽名：簽字日期：年月日導(dǎo)師簽名：簽字日期：年月日摘要沙門(mén)氏菌?。╯almonellosis）是各種動(dòng)物由沙門(mén)氏菌屬細(xì)菌引起的疾病的總稱(chēng)。臨床表現(xiàn)為敗血癥和腸炎，可導(dǎo)致懷孕母畜流產(chǎn)，也可導(dǎo)致人食物中毒和急性胃腸炎。腸炎沙門(mén)氏菌(Salmone
4、llaenteritidis)是引起人類(lèi)食源性疾病的主要革蘭陰性菌之一，引起家禽發(fā)病死亡，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，并且被腸炎沙門(mén)氏菌污染的畜禽產(chǎn)品嚴(yán)重危害人類(lèi)健康,已成為公共衛(wèi)生的所關(guān)注的問(wèn)題。因此研制一種有效的疫苗控制本病，是科研人員所面臨的重要任務(wù)。本試驗(yàn)構(gòu)建出基于焦亡相關(guān)蛋白基因介導(dǎo)的新型菌蛻的溶菌質(zhì)粒，然后在大腸桿菌DH5α中測(cè)定溶解率，達(dá)到99.99％以上，可用于腸炎沙門(mén)氏菌菌蛻的制備。采用電擊穿孔法將溶菌質(zhì)粒轉(zhuǎn)入腸炎沙門(mén)氏菌中，在阿拉伯糖誘導(dǎo)下使其裂解，制成沙門(mén)氏菌菌影疫苗。用制備的沙門(mén)氏菌菌蛻疫苗小鼠進(jìn)行免疫。將100只6-8周齡的小鼠，隨機(jī)分為5組，即為滅活苗組、
5、滅活苗+佐劑組、菌蛻組、新型菌蛻組和對(duì)照組，共免疫3次。免疫后眼部采血分離血清，以沙門(mén)氏菌超聲上清為包被抗原，用間接ELISA方法檢測(cè)血清中IgG水平。刺激分離免疫小鼠脾細(xì)胞，刺激物為腸炎沙門(mén)氏菌脂多糖（LPS），試劑盒檢測(cè)細(xì)胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的分泌情況，++并用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4及CD8細(xì)胞亞群動(dòng)態(tài)變化。三免后7天用SM6進(jìn)行攻毒。攻毒1周后，觀察臨床癥狀、存活動(dòng)物數(shù)及病理組織學(xué)研究，評(píng)價(jià)免疫保護(hù)效果。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著免疫次數(shù)的增加，各試驗(yàn)組血清特異性抗體水平逐漸升高，對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組差異極顯著（P<0.001），新型菌蛻組與滅活苗組差異極顯著（P<0.
6、001），與滅活苗+佐劑、菌蛻組差異不顯著（P>0.05）。細(xì)胞因子IL-2、IL-4和IFN-γ的檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，各實(shí)驗(yàn)組IL-2、IL-4和IFN-γ的++細(xì)胞因子水平也呈上升趨勢(shì)，能引起較強(qiáng)的細(xì)胞免疫。CD4及CD8亞群的動(dòng)態(tài)變化表明疫苗組可誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞的增殖，各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異極顯著（P<0.001），新型菌蛻組與滅活苗組差異極顯著（P<0.001），與滅活苗+佐劑、菌蛻組差異不顯著（P>0.05）。從攻毒后保護(hù)效果來(lái)看，各試驗(yàn)組高于對(duì)照組，新菌蛻組與菌蛻組保護(hù)率相同為100%，滅活苗組保護(hù)率為30%，滅活苗+佐劑保護(hù)率為70%，攻毒后無(wú)明顯發(fā)病癥狀。結(jié)
7、果表明新沙門(mén)氏菌菌蛻疫苗能夠誘導(dǎo)較高的細(xì)胞免疫和體液免疫，對(duì)沙門(mén)氏菌的攻擊起到了很好的保護(hù)作用，本研究I結(jié)果為腸炎沙門(mén)氏菌新型疫苗的研制提供了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：腸炎沙門(mén)氏菌；菌蛻；免疫應(yīng)答；保護(hù)效力IIAbstractSalmonellosisisacontagiousdiseasecausedbySalmonellainvariousanimals,whichleadtocancausesepsis,enteritis,canleadtopregnancymaternalabortion,foodpois
