htra1在食管鱗癌中的作用及其分子調(diào)控機(jī)制

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1、Athesis(dissertation)submittedtoZhengzhouUniVersityforthedegreeofMaster(doctor)Ef．fectandmolecularregularmechanismofHtrAlindeVelopment0fesophagealsquamousCe¨carcinomaByJinXiaSupervisor：Pro￡Qing—xiaFANOncologytheFirstAf!filiatedHospitalS印2013原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研

2、究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者：勇贏日期：≯一'年lr月甲日學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學(xué)。根據(jù)鄭州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留或向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復(fù)制手段保存論文

3、和匯編本學(xué)位論文。本人離校后發(fā)表、使用學(xué)位論文或與該學(xué)位論文直接相關(guān)的學(xué)術(shù)論文或成果時(shí)，第一署名單位仍然為鄭州大學(xué)。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學(xué)位論文作者：墨忒日期：沙。，年，，月砷日摘要HtrAl在食管鱗癌發(fā)生中的作用及其分子調(diào)控機(jī)制博士研究生：夏金導(dǎo)師：樊青霞鄭州大學(xué)一附院腫瘤科鄭州450052摘要食管癌是常見的消化道腫瘤之一，全球每年新發(fā)約40萬例，其中超過25萬在中國。特別在河南林縣、磁縣等太行山地區(qū)，食管癌的發(fā)病率居世界首位，超到100／100000，是當(dāng)?shù)貝盒阅[瘤第一致死原因，成為威脅當(dāng)?shù)厝嗣袢罕姷闹饕獝盒阅[瘤之一。在西方國家，食管腺

4、癌的發(fā)病率占食管癌的60％一70％，國內(nèi)90％以上的食管癌是食管鱗癌(esophagealsqu鋤ouscellcarcinoma，ESCC)。食管癌患者總體預(yù)后較差，約一半患者就診時(shí)已為晚期，自然病程僅6．8個(gè)月，5年生存率10％．25％?？梢允中g(shù)的患者約有90％發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。分期很早的患者(T1NoMo)，5年生存率可達(dá)90％，仍有近一半在5年內(nèi)復(fù)發(fā)。腫瘤的局部侵犯及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移仍是死亡的主要原因，轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的防治是當(dāng)前食管癌研究的熱點(diǎn)和重點(diǎn)。近年來，國內(nèi)外學(xué)者不斷的研究探討食管癌發(fā)生，轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的機(jī)制，以期提高食管癌患者生存率。HtrAl第一個(gè)發(fā)現(xiàn)的

5、Ht俄蛋白家族成員，是一種分泌蛋白，通過在關(guān)節(jié)炎中的上調(diào)作用和腫瘤的進(jìn)展和浸潤過程中通過降解細(xì)胞外基質(zhì)顯示重要作用。一些研究表明，HtrAl通過下調(diào)作用在轉(zhuǎn)化成纖維細(xì)胞一些腫瘤的惡性進(jìn)展中起著重要作用，例如：卵巢癌，黑色素瘤。此外，通過體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)證明其過表達(dá)抑制細(xì)胞的生長和增殖，其可能發(fā)揮抑制基因的作用。有關(guān)食管鱗狀細(xì)胞癌中HtrAl的表達(dá)及其與食管鱗狀細(xì)胞癌發(fā)生與發(fā)展，轉(zhuǎn)移浸潤等關(guān)系的研究，迄今尚未見國內(nèi)外報(bào)道。摘要鑒于上述，本研究首先采用采用原位雜交技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測食管鱗癌組織和相對應(yīng)的正常食管黏膜組織中H仃A1mRNA和蛋白的表

6、達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系；然后利用ImPCR技術(shù)擴(kuò)增人HtrAl基因，將其克隆入pcDNA3．1(+)質(zhì)粒中，用建立HtrAl真核表達(dá)載體pcDNA．HtrAl。在EC9706細(xì)胞中表達(dá)，獲得穩(wěn)定的高表達(dá)HtrAl細(xì)胞系，觀察H仃A1基因表達(dá)上調(diào)對EC9706細(xì)胞增生物學(xué)行為及侵襲能力的影響，研究NF．KB信號途徑及下游靶基因的表達(dá)水平的變化；最后將上調(diào)Ht俄l表達(dá)載體pcDNA．HtrAl轉(zhuǎn)染EC9706細(xì)胞，經(jīng)G418篩選后獲穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞，擴(kuò)增細(xì)胞后通過皮下注射的方式接種于裸鼠體內(nèi)，進(jìn)行裸鼠體內(nèi)致瘤實(shí)驗(yàn)，采用免疫組織化學(xué)分析不同處

7、理組EC9706裸鼠移植瘤中HtrAl，Ki．67蛋白的表達(dá)，Westemblotting方法檢測各組裸鼠移植瘤組織中NF．1(B信號途徑及下游靶基因的表達(dá)水平的變化?？傊緦?shí)驗(yàn)以H仃A1為分子靶點(diǎn)，探討其在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中的作用，共分為三個(gè)部分。第一部分：HtrAl在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其預(yù)后分析方法1．采用原位雜交技術(shù)和免疫組織化學(xué)技術(shù)，檢測115例食管鱗癌組織和相對應(yīng)的正常食管黏膜組織中HtrAlmIⅢA和蛋白的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系。2．采用半定量ImPCR分析和Wbstemblotting技術(shù)隨機(jī)選取3例食管鱗癌癌

8、組織和相對應(yīng)的正常食管黏膜組織中Ht以1mRNA和蛋白的表達(dá)，利用Kaplan．Meier生存曲線分析Htr