hsa-mir-675-5p在食管鱗癌中的表達及其功能機制研究

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1、萬方數(shù)據(jù)中圖分類號B魚主5：壘UDC610博士學位論文學校代碼10533Hsa．miR-675．5p在食管鱗癌中的表達及其功能機制研究Theexpressionandfunctionstudyofhsa-·miR··675··5pinesophagealsquamouscellcarcinoma作者姓名：張航學科專業(yè)：臨床醫(yī)學研究方向：外科學(心胸外科)學院(系、所)：指導教師：湘雅醫(yī)院張春芳教授答辯委員中南大學二O一三年六月萬方數(shù)據(jù)本課題受如下基金資助：1．國家自然科學基金資助項目【30670990)2．國家自然科學基金資助項目(30871189)3．湖南省自

2、然科學基金資助項目(2010FJ3134)萬方數(shù)據(jù)原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文是本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學或其他單位的學位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：攤?cè)掌冢呵夷辍辉绿m日學位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，即：學校有權(quán)保留學位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學位論文，允許學位論文被查閱和借閱；學?？梢怨紝W位論文的

3、全部或部分內(nèi)容，可以采用復印、縮印或其它手段保存學位論文。同時授權(quán)中國科學技術(shù)信息研究所將本學位論文收錄到《中國學位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提供信。B,N務(wù)。日期：互啦年』月蘭日萬方數(shù)據(jù)Hsa—miR-675—5p在食管鱗癌中的表達及其功能機制研究摘要：研究背景microRNAs(miR_NAs)是一類非編碼的長度大約19--'24個核苷酸的單鏈小RNA分子，參與靶基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控。成熟的miRNA可以通過和下游靶基因mRNA的3’UTR以非完全匹配方式相結(jié)合，從而干擾和抑制靶基因mRNA的翻譯。此外，miRNA還可以通過使靶基因mRNA脫腺苷

4、酸化的作用從而降解靶基因mRNA以此抑制靶基因的表達。miRNA廣泛參與細胞的增殖、分化、凋亡、應(yīng)急反應(yīng)、免疫反應(yīng)等多種生命活動過程，作為癌基因或抑癌基因?qū)δ[瘤細胞的生長、增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移以及血管生成的調(diào)節(jié)發(fā)揮著重要作用。目前通過miRNA芯片雜交方法許多惡性腫瘤的miRNA表達譜得以建立，其中一些miRNA成為腫瘤治療的新的靶點并成為臨床患者預(yù)后的腫瘤標志物。當然，miRNA在食管癌中的研究也越來越多，隨著研究的不斷深入，大量的miRNA在食管癌中的作用得以明確。近年來研究發(fā)現(xiàn)miR．675在人類結(jié)腸癌、胰腺癌、漿液性子宮內(nèi)膜癌和子宮內(nèi)膜癌肉瘤表達上調(diào)，和CO

5、PD患者相比，miR．675在肺癌患者的血液中也呈過表達。最近H19被證實是miR．675的前體，并且H19在人類肝癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、睪丸癌、絨毛膜癌、結(jié)腸癌、肺癌、胃癌、宮頸癌、食管癌等惡性腫瘤中也被發(fā)現(xiàn)過表達。鑒于H19在食管癌組織中高表達并且H19是miR-675的前體，我們推測miR-675可能在食管癌的發(fā)生和發(fā)展過程中同樣發(fā)揮了重要作用，而此研究國內(nèi)外尚無報道，于是我們進行了本課題的研究。由于H19可以轉(zhuǎn)錄合成成熟的miR-675．5p及miR-675—3p兩個片段序列，在本課題研究中我們選用miR．675．5p進行研究。II萬方數(shù)據(jù)目的研究

6、miR-675．5p在食管鱗癌組織中的表達水平及其臨床病理意義，同時觀察miR-675．5p對食管鱗癌細胞生物學行為以及細胞通路的影響并預(yù)測其靶基因。方法1．通過實時熒光定量PCR技術(shù)檢測H19、miR-675．5p在食管鱗癌組織及細胞系中的表達情況，分析二者的相關(guān)性，并重點分析H19、miR-675．5p與食管鱗癌患者臨床病理特征的相關(guān)性：2．通過慢病毒感染Ecal09和EC9706細胞，上調(diào)和下調(diào)Ecal09和EC9706細胞中miR-675．5p的表達，觀察其對食管鱗癌細胞增殖、周期分布、細胞凋亡、侵襲遷移能力以及裸鼠致瘤等細胞生物學特性的影響；3．采用熒

7、光素酶報告基因?qū)嶒灧椒ㄓ^察miR．675．5p在Ecal09和EC9706細胞中對預(yù)測靶基因的作用并進行驗證；4。通過實時熒光定量PCR和Western免疫印跡觀察靶基因REPS2mRNA及蛋白水平在慢病毒轉(zhuǎn)染LV．miR-675．precursor和LV．miR-675．5p．inhibition后在Ecal09及EC9706細胞系中的表達情況，同時應(yīng)用Western免疫印跡觀察RACl、CDC42蛋白在慢病毒轉(zhuǎn)染LV—miR-675-precursor和LV-miR-675-5p—inhibition后在Ecal09及EC9706細胞系中的表達情況；5．通過

8、實時熒光定量PCR及We