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《利用人內(nèi)皮抑素基因構(gòu)建植物表達(dá)載體及對(duì)煙草遺傳轉(zhuǎn)化》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文利用人內(nèi)皮抑素基因構(gòu)建植物表達(dá)載體及對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化摘要，●人內(nèi)皮抑素(Endostatin)是第一個(gè)進(jìn)入臨床研究的內(nèi)源性血管生成抑制劑，是膠原蛋白XⅧC末端非膠原區(qū)NCl結(jié)構(gòu)域的20KD的片段。它可以抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，從而降低腫瘤內(nèi)血管生成，阻斷營(yíng)養(yǎng)通路，達(dá)到殺死腫瘤細(xì)胞的目的。其最大的優(yōu)點(diǎn)是無毒性和無抗藥性。植物生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥物蛋白成本低，生產(chǎn)等量目的蛋白只需要花其它表達(dá)系統(tǒng)所需費(fèi)用的10％，而且一旦建立起穩(wěn)定而高效的表達(dá)系統(tǒng)，只需擴(kuò)大種植面積就可大量生產(chǎn)目的蛋白。本研究將人內(nèi)皮抑素基因重組于植物雙元
2、表達(dá)載體pGA643，得到重組質(zhì)粒pGE；用三親融合法將其導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBM404中，采用葉盤法轉(zhuǎn)化煙草，經(jīng)誘導(dǎo)與篩選，獲得了卡那霉素抗性植株；提取抗性植株總DNA，通過PCR、斑點(diǎn)雜交和Southern雜交檢測(cè)，篩選出了整合有外源基因的轉(zhuǎn)化植株，為進(jìn)一步研究人內(nèi)皮抑素在煙草中的表達(dá)及生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：人內(nèi)皮抑素，煙草，根癌農(nóng)桿菌，生物反應(yīng)器內(nèi)蒙古大學(xué)碩士學(xué)位論文CONSTRUCTIONOFPI。ANTEXPRESSIONVECTORWITHHUML▲NENDOS衛(wèi)鲴['INGENEANDTRASFORM姍ONOFTOBACC
3、oABS衛(wèi)RAC·Endostatin，acarboxy·terminal20KDafragmentofthenon-collagenous(NC)1domainofcollagenXⅧ，isthefirstendogenousangiogenesisinhibitorenteringhumanclinicaltherapy．Itcaninhibitendothelialcellmigrationandmultiplicationtoreducethevascularizationoftumorsandfinallykilltumors
4、．Thegreatadvantageoftheagentliesinitslesstoxicityandnotinducingdrugresistancewhenused．Theuseofplantbioreactorsfortheproductionofrecombinantpharmaceuticalproteinsissafeandinexpensive．Cultivatingtransgenicplantsonanagriculturalscalewillproducealmostunlimitedsuppliesofrecom
5、binantproteinsforusesinmedicine．TheplantexpressionvectorpGE，carryingahumanendostafingene，WASconstructed．pGEwasintroducedintoAgrobacteriumtumefaciensbytriparentalmating．TobaccoleafdiscsweretransformedviaAgrobacteriumtumefaciensmediatedprocedure．Transgenictobaccoplantletsg
6、rewininductionmediumandplantsresistanttokanamycinwereobtained．PCR，DotblottingandSouthernhybridizationanalysisconfirmedthathumanendostatingenehadintegratedintothegenomeoftobacco．KEYWORD：humanendostatin，tobacco，Agrobacteriumtumefaciens，bioreactor利用人內(nèi)皮抑素摹岡構(gòu)建植物表達(dá)載體及對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化引
7、言腫瘤一直是人類難以攻克的頑癥，F(xiàn)olkman等通過試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)實(shí)體腫瘤的生成、轉(zhuǎn)移須有血管的生成，提出抑制腫瘤血管的形成可作為治療腫瘤的一種新的治療途徑【“甜。1997年0、Reilly等13l從小鼠血管內(nèi)皮瘤EOMA細(xì)胞的培養(yǎng)上清液中分離獲得了一種可抑制新生血管生成的天然分子，命名為內(nèi)皮抑素(Endostatin)。同年，我國徐根興14I教授在研究?jī)?nèi)皮細(xì)胞的過程中發(fā)現(xiàn)了人內(nèi)皮抑素，并從人肝cDNA文庫中篩選克隆得到人內(nèi)皮抑素基因。內(nèi)皮抑素是膠原蛋白XⅧC末端非膠原區(qū)NCl結(jié)構(gòu)域的184個(gè)氨基酸的多肽片段，分子量為20KD，具有肝素結(jié)合的
8、能力【3’5～。實(shí)驗(yàn)表明內(nèi)皮抑素是內(nèi)皮細(xì)胞增殖、遷移和血管生成的專一抑制劑，在小鼠腫瘤模型中可抑制腫瘤的形成及轉(zhuǎn)移，使已形成的腫瘤萎縮，并且反復(fù)施用無耐藥性和毒性的產(chǎn)生【7’8’9J，因而內(nèi)皮抑素一度成為腫
