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《引起急性肝胰腺壞死病的副溶血性弧菌MLST及耐藥性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、上海海洋大學碩士學位論文學校代碼：10264研究生學號：M150208411上海海洋大學碩士學位論文題目：引起急性肝胰腺壞死病的副溶血性弧菌MLST及耐藥性研究Multilocussequencetypingandantibiotic英文題目：resistanceanlysisofAHPND-causingVibrioparahaemolyticus專業(yè)：食品科學與工程研究方向：食品安全姓名：孫明玉指導教師：趙勇二O一八年五月二十七日上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學學
2、位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學術(shù)道德，崇尚嚴謹學風。所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學學位論文版權(quán)使用授權(quán)書學位論文作者完全了解學校有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查
3、閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學可以將本學位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復制手段保存和匯編本學位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學位論文屬于不保密□學位論文作者簽名：指導教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學碩士學位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注答辯地點答辯日期上海海洋大學碩士學位論文上海海洋大學碩士學位論文引起急性肝胰腺壞死病的副溶血性弧菌MLST及耐藥性研究摘要對蝦急性肝胰臟壞
4、死?。╝cutehepatopancreaticnecrosisdisease，AHPND）2009年首次在中國暴發(fā)，之后越南（2010），馬來西亞（2011），泰國（2012）和墨西哥（2013）菲律賓（2015）等地接連發(fā)生。這是一種細菌性疾病，患病對蝦死亡率極高（高達100%）。截止到2013年，AHPND給亞洲的對蝦養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)造成了前所未有的危害，致使每年經(jīng)濟損失超過10億美元，并且仍有進一步擴大的趨勢。2013年Lightner等研究發(fā)現(xiàn)引起AHPND的元兇是一種被噬菌體病毒感染后發(fā)生了
5、變異的副溶血性弧菌。2015年臺灣的研究小組選擇自然缺失與實驗刪除pirA和pirB毒力基因的突變株進行試驗，發(fā)現(xiàn)兩類突變株致病能力均消除，為此進一步證實PirA和PirB毒素是引起急性肝胰腺壞死病的最終病因。在現(xiàn)有的研究基礎(chǔ)上，發(fā)展面向凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死病的高效診斷及防控技術(shù)研究，是減少AHPND疫情的風險，使蝦農(nóng)受益的關(guān)鍵。本課題從AHPND的診斷入手，建立熒光原位雜交檢測方法，可視化的監(jiān)測環(huán)境及對蝦組織中的致病菌，進一步證實本實驗室保存的AHPND菌株具有致病性。其次是以該致病株為實
6、驗材料，并下載國際上其他地區(qū)AHPND致病株的管家基因信息，分析全球范圍內(nèi)AHPND致病菌的流行性和遺傳學關(guān)系。最后我們從基因型和表型兩方面研究AHPND致病菌的耐藥性，為促進對蝦養(yǎng)殖業(yè)的健康可持續(xù)發(fā)展提供理論依據(jù)，這對我國的水產(chǎn)生態(tài)安全和經(jīng)濟發(fā)展具有重要的現(xiàn)實意義。1.VPAHPND熒光原位雜交檢測方法的建立本研究基于pirA基因設(shè)計熒光原位雜交探針，檢測引起對蝦急性肝胰腺壞死病的副溶血性弧菌。通過序列比對軟件ClustalX發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有的pirA基因保守無突變，采用PrimerPremier5軟
7、件設(shè)計探針。探針核酸序列通過NCBI數(shù)據(jù)庫BLAST選項初步檢驗不匹配他種屬非AHPND菌株。為進一步驗證其特異性，選取21株非AHPND致病菌和12株AHPND致病菌進行驗證，F(xiàn)ISH檢測可以鑒別出12個AHPND陽性樣本，與PCR檢測方法結(jié)果一致。本研究設(shè)計的pirA探針與AHPND致病性的副溶血性弧菌雜交時，熒光信號清晰，菌體形狀明顯。同時用pirA探針檢測患病對蝦肝胰腺切片時看到有明顯的致病菌存在。FISH可以用來檢測環(huán)境和蝦組織中的AHPND致病性的副溶血性弧菌。本研究將為更好地了解這
8、些環(huán)境微生物對水產(chǎn)品的危害提供更多的工具。I上海海洋大學碩士學位論文2.引起凡納濱對蝦急性肝胰腺壞死病的副溶血弧菌MLST新序列型本研究針對不用地區(qū)急性肝胰腺壞死病致病性副溶血弧菌，運用多位點測序技術(shù)，分析了致病菌株的遺傳特征。實驗選擇副溶血弧菌的7個管家基因dnaE、gyrB、recA、dtdS、pntA、pyrC及tnaA，對AHPND致病菌擴增測序。將核酸序列上傳至PubMLST數(shù)據(jù)庫進行比對后獲得每株菌的序列型。同時收集不同地區(qū)AHPND致病性副溶血弧菌的MLST數(shù)據(jù)，采用eBURSTV
