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《萍鄉(xiāng)紅鯽hira基因克隆、表達(dá)分析及多克隆抗體制備 (1)》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要＼刪艄摘要萍鄉(xiāng)紅鯽(Pingxiangred-transparentcruciancarp，Carassiusauratusvar．Pingxiangnensis)是分布在江西省萍鄉(xiāng)地區(qū)的天然三倍體鯽突變體，經(jīng)人工選育后獲得的遺傳性狀基本穩(wěn)定的后代，具有兩性生殖和雌核發(fā)育兩種生殖方式。Hir／Hira基因是一種組蛋白基因表達(dá)負(fù)調(diào)節(jié)因子，其產(chǎn)物HIR／HIRA作為組蛋白的伴侶蛋白，廣泛存在于多種生物體內(nèi)發(fā)揮不同的作用。HIRA蛋白家族最顯著的特點(diǎn)是氨基酸序列N端存在7個(gè)高度同源的WD40結(jié)構(gòu)域，此結(jié)構(gòu)域常介導(dǎo)蛋白質(zhì)之間的相互作用，參
2、與多種細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)，在信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、蛋白運(yùn)輸、染色體修飾、轉(zhuǎn)錄或RNA加工、細(xì)胞凋亡等過程中具有重要作用。另據(jù)報(bào)道稱Hira基因可能對魚類精核解凝發(fā)揮重要作用。因此，本研究以萍鄉(xiāng)紅鯽為材料，對t-矗ra基因在三倍體魚類中基因構(gòu)成及表達(dá)特征進(jìn)行了初步探索，為研究該基因在生殖發(fā)育過程中的作用打下基礎(chǔ)。主要內(nèi)容如下：1．采用SMARTcDNA合成和RACE．PCR等技術(shù)，克隆得到全長cDNA序列，長度為3851bp，包含一個(gè)3033bp的開放閱讀框，編碼1010個(gè)氨基酸。為提交和查閱序列方便，將此序列命名為C．a(chǎn)uratusvar．Pingx
3、iangnensi．HIRA(簡寫為Cavp．HIRA)，并提交到NCBI錄入GenBank中，登錄號(hào)為HM067834。另外，通過生物軟件分析，發(fā)現(xiàn)萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因與銀鯽Hira基因在進(jìn)化分類上存在較高的同源性，并且在其推導(dǎo)氨基酸序列N端包含7個(gè)WD40區(qū)，因而推定萍鄉(xiāng)紅鯽HIRA屬于HIRA蛋白家族。2．利用熒光定量PCR技術(shù)檢測了Hira基因在萍鄉(xiāng)紅鯽心、肝、脾、腎、腦、肌肉、精巢、卵巢等組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該基因在卵巢中大量表達(dá)，而在其余組織中存在少量表達(dá)或是不表達(dá)的情況，與所做的RT-PCR結(jié)果基本吻合。3．在克隆
4、得到的序列開放閱讀框內(nèi)，選取了一段長550bp的保守結(jié)構(gòu)域進(jìn)行了蛋白原核表達(dá)，用親和層析法純化了表達(dá)產(chǎn)物，利用紫外吸收差法測定純化蛋白濃度，并將其作為抗原免疫家兔，成功制備了多克隆抗體，以便用于后期免疫熒光組織化學(xué)等實(shí)驗(yàn)。本研究為萍鄉(xiāng)紅鯽Hira基因在魚類遺傳發(fā)育方向的研究打下基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：萍鄉(xiāng)紅鯽；Hira；WD40；三倍體鯽魚；雌核發(fā)育：熒光定量PCRAbstractABSTRACTCarassiusauratu$var．Pingxiangnensisarenaturaltriploidcruciancarp，distributi
5、nginPingxiangregionJiangxiProvince．Weobtainedsteady’goingoffspringofhereditarycharacter,throughartificialbreeding，whosemodesofreproductionaregamogenesisandgynogenesis．Asakindofnegativeregulatorsinhistonegeneexpression，theproducionofgeneH／r／Hira--HIP．／HIRA．iswidespreadin
6、vivoandplaysdifferentroles勰histonechaperones．ThemostsignificantfeatureofHIRAproteinfamilyisthattheNterminalsequenceofaminoacidhas7highhomologousWD40structuraldomains．ThisdomainoftenCanmediateinteractionsamongproteins，involvinginVariOUSkindsofcellfunctionregulation．Andit
7、canplayanimportantroleinsignaltransduction，proteintransport，chromosomemodification,transcriptionorRNAprocessing，andcellapoptosisprocess．Inaddition，accordingtoreportsonfishsperm，Hiragenemayplayanimportantroleinthenuclearcoacervationsolution．Therefore，thisstudyinPingxiang
8、redcruciancarp，hadapreliminaryexplorationongeneticconstitutionandexpressionoftheHirageneinthetriploidfish．Itpr
