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《彩鯽ran基因原核表達蛋白多克隆抗體的制備.pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、第36卷第2期淡水漁業(yè)2006年3月VoI.36No.2FreshwaterFisheriesMar.2006彩鯽ran基因原核表達蛋白多克隆抗體的制備李常健，蔣瓊鳳（湖南科技學院生命科學與化學工程系，湖南永州425006）摘要：采用SDS-PAGE分離純化彩鯽（Carassiusauratusgibelio）ran基因編碼區(qū)cDNA全長序列的原核表達蛋白，并以此為抗原免疫家兔，制備了相應的多克隆抗體；WesternbIotting結果表明，該抗體效價為lfl000，具有較高的特異性。并從抗原蛋白相對分子質量、每次注射蛋白量、注射方式、注射途徑等諸方面對該技術的要點進行了介紹。關鍵詞：彩鯽；r
2、an基因；原核表達蛋白；多克隆抗體中圖分類號：S9l7；@959.403文獻標識碼：A文章編號：l000-6907-（2006）02-0003-03PreparationofMulticlonalAntibodyagainstExpressedProteinofColorCrucianCarpranGeneinE.coliLIChang-jian，JIANG@iong-feng（DepartmentofLifeSciencesandChemicalEngineering，HunanInstituteofScienceandEngineering，Yongzhou，China425006）Abs
3、tract：TheproteincodedbythefuII-IengthcDNAseguenceofrangenefromcoIorcruciancarp（Carassiusauratusgibelio）expressedinE.coliwasseparatedandpurifiedbySDS-PAGEinourstudy.Moreover，theexpressedproteinwasappIiedtoimmunizerabbitsandcorrespondingmuIticIonaIantibodywasprepared.WesternbIottingresuItsindicatedtha
4、tthepreparedantibodyhadthehightite（rlfl000）andhighspecificity.Moreover，thekeysofthistechnigueincIudingthereIativemoIecuIarmassofantigen，theguantityofproteinsineachinjection，procedureofinjection，andapproachesofinjectionwereaIsointroducedinthispaper.Keywords：cruciancarp（Carassiusauratusgibelio）；rangen
5、e；prokaryoticexpressionprotein；muIticIonaIantibody魚類是脊椎動物中物種多樣性最豐富的動物類l實驗材料和方法群，因其具有許多優(yōu)良特性而成為細胞和發(fā)育生物［l，2］學研究的良好模式動物。為了對魚類基因的表1.1表達蛋白的分離純化達特征及其功能進行深入研究，常需要首先對目的l.l.l菌體破碎基因編碼區(qū)或其部分編碼序列在大腸桿菌中進行原挑選表達目的基因的大腸桿菌菌體于LB固體核表達，然后以表達蛋白為抗原制備相應的單克隆培養(yǎng)基（加入l00!g/mLAmp）上劃線，37C培養(yǎng)或多克隆抗體。其中多克隆抗體的制備方法簡便，l6h后，挑取單個克隆到5mLLB液體
6、培養(yǎng)基（加［3~5］周期較短，在科研中應用廣泛。本文以彩鯽入l00!g/mLAmp）中，搖床培養(yǎng)l0h至對數期，ran基因編碼區(qū)cDNA全長序列原核表達蛋白多克然后加入終濃度為lmmoI/L的IPTG在37C誘導隆抗體的制備過程為例，就如何快速制備魚類基因表達3~6h。未加IPTG誘導的菌液作為對照。原核表達蛋白的高效價、高特異性的多克隆抗體進取0.5mL菌液，離心去上清，用抽提液行介紹和討論。（20mmoI/LTris-HCI，pH7.2，5mmoI/L"-磷收稿日期：2005-ll-28資助項目：湖南省自然科學基金項目（編號：05JJ40035）、湖南省高等學?？蒲薪涃M（青年項目，編號：0
7、4B052）資助第一作者簡介：李常?。╨968-），男，湖南永州人，博士，副教授，主要從事魚類遺傳學研究及教學工作。E-maiI：Icjl9l9@l63.com4淡水漁業(yè)2006年酸甘油，1mmoI/LEGTA，1.5mmoI/LMgCI2，以樣品稀釋倍數，即為每mL該樣品所含可溶性蛋50mmoI/LNaCI，1mmoI/LDTT，1!g/mLaprotinin，白質的量。1!g/mLIeupep
