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《沉默XRCC4基因表達(dá)對(duì)三陰性乳腺癌放射治療敏感性的影響》由會(huì)員上傳分享,免費(fèi)在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、單位代碼10475學(xué)號(hào)104753140965分類(lèi)號(hào)R6碩士學(xué)位論文沉默XRCC4基因表達(dá)對(duì)三陰性乳腺癌放射治療敏感性的影響學(xué)科、專(zhuān)業(yè):臨床醫(yī)學(xué)、外科學(xué)研究方向:乳腺惡性腫瘤申請(qǐng)學(xué)位類(lèi)別:醫(yī)學(xué)碩士申請(qǐng)人:溫玉清指導(dǎo)教師:傅侃達(dá)副教授左曙光教授二〇一七年六月SilencingofXRCC4expressionwithshRNAincreasedRadiosensitivityofTriple-negativeBreastCancerCellsADissertationSubmittedtotheGraduateSc
2、hoolofHenanUniversityinPartialFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofMasterofMedicineByYuQingWenSupervisor:Prof.KanDaFu;Prof.ShuGuangZuoJune,2017摘要背景:三陰性乳腺癌(TripleNegativeBreastCancer,TNBC)是指雌激素受體(ER)、孕激素受體(PR)和人表皮生長(zhǎng)因子受體2(Her-2)均為陰性的乳腺癌。雖然TNBC對(duì)放、化療較為敏感,但是其
3、對(duì)傳統(tǒng)的內(nèi)分泌治療及針對(duì)Her2的靶向治療不敏感,因此其遠(yuǎn)期治療效果不佳,預(yù)后較差。放射治療是TNBC治療的重要組成部分,是重要的局部治療手段之一,但是其本身存在強(qiáng)烈的毒副作用。放射劑量較小,不能達(dá)到很好的殺傷腫瘤細(xì)胞的效果;放射劑量較大,則可能會(huì)引起嚴(yán)重的并發(fā)癥,如皮膚損傷,敏感組織(如骨髓、睪丸、卵巢等)的功能減退甚至喪失;嚴(yán)重的放射損傷,可能會(huì)有放射性截癱、腦壞死等極為嚴(yán)重的并發(fā)癥。因此,探索如何提高TNBC對(duì)放射的敏感性十分必要和迫切,從而實(shí)現(xiàn)以更小的放射劑量達(dá)到治療TNBC的目的,減少治療過(guò)程中的并發(fā)癥
4、。X線修復(fù)交叉互補(bǔ)基因4(X-rayrepaircrosscomplementingprotein4,XRCC4)是DNA雙鏈斷裂修復(fù)途徑NHEJ中非常重要的一員。該基因表達(dá)的蛋白可以與連接酶IV相互作用形成復(fù)合體,對(duì)DNA斷裂進(jìn)行修復(fù),從而維持基因組的穩(wěn)定性和完整性。XRCC4的功能缺失,會(huì)導(dǎo)致DNA修復(fù)途徑出現(xiàn)差錯(cuò),導(dǎo)致DNA損傷的腫瘤細(xì)胞死亡。有研究顯示,在接受放射治療的食管癌患者中,XRCC4的低表達(dá)患者比XRCC4高表達(dá)患者具有更長(zhǎng)的生存時(shí)間,提示XRCC4的低表達(dá)與放療敏感性增加可能有一定的關(guān)系。國(guó)內(nèi)
5、有學(xué)者報(bào)道,在TNBC中,XRCC4的表達(dá)陽(yáng)性率顯著低于癌旁組織,但是與生存期沒(méi)有相關(guān)性。目前關(guān)于XRCC4的表達(dá)水平與TNBC放療敏感性研究,國(guó)內(nèi)外鮮有報(bào)道。目的:探索沉默XRCC4基因表達(dá),是否可以增加三陰性乳腺癌對(duì)放射治療的敏感性。方法:利用分子克隆及RNA干擾技術(shù),建立XRCC4基因沉默的TNBC穩(wěn)定細(xì)胞系;利用MTT比色法檢測(cè)XRCC4沉默對(duì)MDA-MB-231和MDA-MB-468細(xì)胞增殖的影響??寺〖湫纬蓪?shí)驗(yàn)檢測(cè)XRCC4基因沉默對(duì)MDA-MB-231克隆形成能力的影響;進(jìn)一步的,以不同放射劑量(
6、2Gy、4Gy、6Gy)分別對(duì)未感染、空載體感染細(xì)胞和XRCC4沉默TNBC細(xì)胞系進(jìn)行處理,克隆集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)沉默XRCC4基因表達(dá)對(duì)IMDA-MB-231放療敏感性的影響。結(jié)果:1.XRCC4在三陰性乳腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為34.38%,在癌旁組織中的表達(dá)陽(yáng)性率為62.50%,兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.成功構(gòu)建同時(shí)攜帶綠色熒光蛋白和嘌呤霉素基因的shRNA慢病毒表達(dá)載體pLenti-U6-EF1a-copGFP-P2A-Puro。3.利用上述構(gòu)建好的載體,成功構(gòu)建表達(dá)XRCC4-shRN
7、A的慢病毒載體pLenti-U6-XRCC4-EF1a-copGFP-P2A-Puro,包裝慢病毒后,成功建立了穩(wěn)定沉默XRCC4基因的三陰乳腺癌細(xì)胞系MDA-MB-231-XRCC4-和MDA-MB-468-XRCC4-。4.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,未感染、空載體感染和XRCC4-shRNA感染的MDA-MB-231細(xì)胞的增殖倍數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05),在各時(shí)間點(diǎn)(24h、48h、72h),三個(gè)細(xì)胞間的增殖倍數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05)。與未感染和空載體感染細(xì)胞比較,XRCC4-shRNA
8、感染的MDA-MB-468細(xì)胞的增殖倍數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05),在各時(shí)間點(diǎn)(24h、48h、72h),三個(gè)細(xì)胞間的增殖倍數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P>0.05);5.克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,未采用放射輻照時(shí),XRCC4-shRNA感染的MDA-MB-231細(xì)胞的克隆集落數(shù)目與未感染和空載體感染細(xì)胞比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);但是XRCC4-shRN