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《芽孢桿菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶的純化及其穩(wěn)定性研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、天津大學(xué)碩士學(xué)位論文芽孢桿菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶的純化及其穩(wěn)定性研究姓名：劉躍申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：化學(xué)工程指導(dǎo)教師：齊崴20080501中文摘要p．甘露聚糖酶是一種重要的半纖維素酶，應(yīng)用廣泛，多采用微生物發(fā)酵制備。本文首先對發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行簡化與優(yōu)化，并通過分離純化制得高純酶；進(jìn)而運(yùn)用圓二色、二級結(jié)構(gòu)預(yù)測等方法，對酶的結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性進(jìn)行研究，通過添加穩(wěn)定化試劑并優(yōu)化操作參數(shù)，提高了噴霧干燥產(chǎn)品的穩(wěn)定性。主要工作如下：對發(fā)酵培養(yǎng)基氮源、碳源及無機(jī)鹽進(jìn)行篩選優(yōu)化，確定了簡化發(fā)酵培養(yǎng)基組成；最終發(fā)酵液的單位酶活成本較原始發(fā)酵培養(yǎng)基降低63％，大大提高了生產(chǎn)收益，且色素及雜質(zhì)
2、的含量也明顯低于原始培養(yǎng)基，有利于產(chǎn)品的后續(xù)精制。B．甘露聚糖酶粗酶液經(jīng)鹽析、超濾、離子交換層析、凝膠層析及羥基磷灰石層析制得電泳純酶蛋白。電泳分析和凝膠排阻色譜分析估算所得p．甘露聚糖酶分子量一致，約為39kDa?；诖_定的氨基酸序列，運(yùn)用四種算法．APSSP2、SsPR04、PSIPRED、PHD對p一甘露聚糖酶的二級結(jié)構(gòu)及部分性質(zhì)進(jìn)行了預(yù)測和計(jì)算，得到疏水性標(biāo)度值及滴定曲線，pI=5．505，分子量38005．4。利用遠(yuǎn)紫外CD對比分析了p一甘露聚糖酶的二級結(jié)構(gòu)和酶活隨溫度和pH的變化規(guī)律，初步探討了二級結(jié)構(gòu)變化對酶活力的影響，以優(yōu)選出的CDSSTR算法計(jì)算
3、出p一甘露聚糖酶二級結(jié)構(gòu)含量為：0c．螺旋42％，p折疊13％，轉(zhuǎn)角17％，無規(guī)卷曲28％，其三級結(jié)構(gòu)類型為：a+D型。考察了四種添加劑(NaCl、淀粉、蔗糖、糊精)在不同濃度下對噴霧干燥制備D．甘露聚糖酶穩(wěn)定性的影響，結(jié)果表明：添加蔗糖和糊精可大幅提高酶的熱穩(wěn)定性，加入50mg／ml糊精，酶活提高50％，效果最佳；通過響應(yīng)面法優(yōu)化，確定了噴霧干燥三項(xiàng)主要操作參數(shù)的最優(yōu)值：加料流率4．3mL／min，干燥空氣流率31．3L／h，空氣進(jìn)口溫度177℃，此時(shí)酶活較優(yōu)化前提高21．9％，達(dá)3715．9U儋。關(guān)鍵詞：B一甘露聚糖酶，發(fā)酵培養(yǎng)基，純化，穩(wěn)定性，二級結(jié)構(gòu)預(yù)測，
4、圓二色，噴霧干燥，響應(yīng)面法ABSTRACTp-Mannanaseisanimponanthemicellulase，whichiswidelyusedandusuallyproducedbymicrobialfennentationmethod．Inthisthesis，6rstly，thefennentationmediumwassimplifiedandoptimized，andthepuri6edenzymewasobtainedbysepa眥ingandpuri母ing．Then，thecirculardichroismandthepredictionof
5、proteinsecond習(xí)ⅡystnlcturewereemployedininVeStigatingthesmJcturesandstabilizationofp’mannanase．Finally，thestabili妙ofspray—d巧ingproductwasimprovedbyaddingstabilizerandoptimizingoperatingparameters．Themainresults、Ⅳereshownasfollowing：Theni仃ogensources，carbonsourcesandin6rganicsaltsofthef
6、ermentationmediumwerescreenedandoptimized，thesimpli行edfementationmedium、vasdete徹ined．Theunitenzymeactivi哆costof行nalfermentativesolutiondeceasedabout63％comparingwiththatbeforeoptimization，whichsuggestedthatthebenefitwaslargelyincreased．Meanwhile，thepigmentandimpuri夠contentsofthefe徹enta
7、tiVesolutionwereobviouslylowerthanthatbeforeoptimization，whichisbeneficialtothesubsequentenzymerefining．Thep—mannanaseofelec協(xié)ophoreticpuri夠wasprepared仔omcmdeenzymeby鋤moniumsulf．a(chǎn)teprecipitation，UF，DEAE一52sepharose，SephadexG．100，andhydroxyapatitechromatography．Themolecularweightofp．man
8、nanas
